Re: 請問怎麼把蛋白質從PAGE上elute出來?
看板Biotech (生命科學)作者timbrian (perk yourself up)時間19年前 (2006/06/28 21:25)推噓1(1推 0噓 1→)留言2則, 1人參與討論串3/8 (看更多)
※ 引述《aggaci (有氣質的台客)》之銘言：
: 除了用電極的方法 以及買kit...
: 有沒有其他的方法呢?
: 我是跑native PAGE再把想要的band挖出來跑sds-page...
: 謝謝
雖說你說不要用電極.. 但還是提供一個用電極且省錢的
我們實驗室有 electroelutor.各家的都很難用 又貴(當初我試過三大廠牌 都不及格)..
另一個方法是將膠切下來 包在透析膜裡 丟到水平電泳槽 把蛋白質電出來
那你怎知蛋白質被電出來了沒?..
簡單.. 準備一個透析膜 裡面包經過 CBG-R or G 染色的 band
(隨便找個load個蛋白質跑 SDS PAGE 跑完染膠後切下來)
這個 control 組與你的 target protein 兩包透析膜一起丟到水平電泳槽一起電
這當成 control 如果蛋白質被電出來了 這個control 組的顏色就會變淡
(藍色被電出來)
你的蛋白質就可以收了.. 透析膜剛拿出來不需打開 直接透析濃縮 蛋白質就出來了
電極方向也不需太擔心 即便因為是 native PAGE 蛋白質帶電荷不同 跑反了
你的蛋白質仍是被限制在透析膜跑不出來
活性都好好的..
這方法比買又貴又難用的 electoelutor..
或是用超音波震 回收率都沒太糟..
這方法注意兩個重點..
buffer 要適當
再來是透析膜綁好.沒綁好被電出去我也沒辦法
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推
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