Re: 請問怎麼把蛋白質從PAGE上elute出來?
※ 引述《timbrian (perk yourself up)》之銘言：
: ※ 引述《aggaci (有氣質的台客)》之銘言：
: : 除了用電極的方法 以及買kit...
: : 有沒有其他的方法呢?
: : 我是跑native PAGE再把想要的band挖出來跑sds-page...
: : 謝謝
: 雖說你說不要用電極.. 但還是提供一個用電極且省錢的
: 我們實驗室有 electroelutor.各家的都很難用 又貴(當初我試過三大廠牌 都不及格)..
: 另一個方法是將膠切下來 包在透析膜裡 丟到水平電泳槽 把蛋白質電出來
: 那你怎知蛋白質被電出來了沒?..
: 簡單.. 準備一個透析膜 裡面包經過 CBG-R or G 染色的 band
: (隨便找個load個蛋白質跑 SDS PAGE 跑完染膠後切下來)
不建議用CBR染色 蛋白會被fix在膠裡面
推薦用冰的0.25M KCl
挖白色的band，記得一定要用冰的!
: 這個 control 組與你的 target protein 兩包透析膜一起丟到水平電泳槽一起電
: 這當成 control 如果蛋白質被電出來了 這個control 組的顏色就會變淡
: (藍色被電出來)
: 你的蛋白質就可以收了.. 透析膜剛拿出來不需打開 直接透析濃縮 蛋白質就出來了
: 電極方向也不需太擔心 即便因為是 native PAGE 蛋白質帶電荷不同 跑反了
: 你的蛋白質仍是被限制在透析膜跑不出來
: 活性都好好的..
: 這方法比買又貴又難用的 electoelutor..
: 或是用超音波震 回收率都沒太糟..
: 這方法注意兩個重點..
: buffer 要適當
pI>7 用CAPS
pI<7 用1xTAE
: 再來是透析膜綁好.沒綁好被電出去我也沒辦法
其實原po的a兄沒講實驗目的大家也很難幫您想辦法阿 :~~~
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