Re: 請問怎麼把蛋白質從PAGE上elute出來?

看板Biotech (生命科學)作者aggaci (有氣質的台客)時間19年前 (2006/06/28 22:03)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)》之銘言： : ※ 引述《timbrian (perk yourself up)》之銘言： : : 雖說你說不要用電極.. 但還是提供一個用電極且省錢的 : : 我們實驗室有 electroelutor.各家的都很難用又貴(當初我試過三大廠牌都不及格).. : : 另一個方法是將膠切下來包在透析膜裡丟到水平電泳槽把蛋白質電出來 : : 那你怎知蛋白質被電出來了沒?.. : : 簡單.. 準備一個透析膜裡面包經過 CBG-R or G 染色的 band : : (隨便找個load個蛋白質跑 SDS PAGE 跑完染膠後切下來) : 不建議用CBR染色蛋白會被fix在膠裡面 : 推薦用冰的0.25M KCl : 挖白色的band，記得一定要用冰的! 白色???是透明還是白色? 為什麼得用冰的哩? : : 這個 control 組與你的 target protein 兩包透析膜一起丟到水平電泳槽一起電 : : 這當成 control 如果蛋白質被電出來了這個control 組的顏色就會變淡 : : (藍色被電出來) : : 你的蛋白質就可以收了.. 透析膜剛拿出來不需打開直接透析濃縮蛋白質就出來了 : : 電極方向也不需太擔心即便因為是 native PAGE 蛋白質帶電荷不同跑反了 : : 你的蛋白質仍是被限制在透析膜跑不出來 : : 活性都好好的.. : : 這方法比買又貴又難用的 electoelutor.. : : 或是用超音波震回收率都沒太糟.. : : 這方法注意兩個重點.. : : buffer 要適當 : pI>7 用CAPS : pI<7 用1xTAE 這個..............不知道多少哩他應該是個complex : : 再來是透析膜綁好.沒綁好被電出去我也沒辦法 : 其實原po的a兄沒講實驗目的大家也很難幫您想辦法阿 :~~~ 歹勢我講一下實驗流程好了我有一段oligonucleotide 其中5端lebel FITC 拿去做EMSA 我預期可以看的到shift(isotope有，paper也有人這麼做) 再把shift挖下來跑sds-PAGE 將裡面的蛋白質分開以方便做western blot或是MS/MS分析 -- http://0rz.net/da0PG 我的相簿.... 興趣:做實驗、看PAPER、玩音響、聽音樂、養楓葉鼠、彈鋼琴 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.100.165 ※ 編輯: aggaci 來自: 140.114.100.165 (06/28 22:08)