Re: 請問ligation check

看板Biotech (生命科學)作者 (Cheer up!!!)時間19年前 (2006/08/22 22:56), 編輯推噓2(202)
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※ 引述《aggaci (Desperado)》之銘言: : ※ 引述《Duckhunter (Duckhunter)》之銘言: : : 是有專門給GC rich序列使用的 PCR polymerase : : 不過那會比你用限制脢來的更貴上10倍 : : PCR做不出來 : : 用限制脢已經是很便宜的方法了 : 學長有說一個方法 : 有用到phenol-chloroform : onernight culture=>離心=>pellet以phenol+chloroform+DNA dye溶解 : =>離心=>supernatant 取 15 micro-liter跑電泳 : 直接看有接insert和空的plasmid size大小 : 命中率100%...(不過聽他說這方法不會有supercoil的問題) : 謝謝各位 用這個方法時agarose膠的percentage要高一點...不然會分離不出來... 要記得跑control組...不然會不知道怎麼比 此外..我不太清楚這方法是不是有適用於一些特定的host... 我只知道以前作都做的出來...現在到新的實驗室後用這方法卻都做不出來.. 囧囧囧... -- 我的暗黑圖片收藏 http://www.wretch.cc/album/album.php?id=suny&book=4 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.208.29

08/22 23:17, , 1F
是阿,用這個方法條件是insert不能太短
08/22 23:17, 1F

08/23 01:29, , 2F
短的insert可用兩端酵素不同的載體 設計成一端酵素如果有
08/23 01:29, 2F

08/23 01:34, , 3F
insert 則切不動 所以之後用兩種酵素分別check
08/23 01:34, 3F

08/23 01:34, , 4F
如果 一個有切動 一個沒有 就表示有clone成功了
08/23 01:34, 4F
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