Re: [問題] SDS-PAGE跑膠 很多問
※ 引述《leondemon (狗狗)》之銘言：
: 我是第一次跑SDS-PAGE
: 跑PAGE的藥劑幾乎都是買新的~
: 藥品狀態如下:
: Running Buffer:放了一年的10倍stock(已開封)，跑膠前稀釋配置完畢。
: Acry/Bis:放了一年，未開封，一直躺在4度冰箱
: APS:新買藥粉，配了1CC，冰在-20冰箱
: TEMED:新買藥劑，平時放在陰暗處，瓶子為褐色避光材質。
: SDS:新買藥粉，配了10%放在室溫
: Tris:新買藥粉，配了1.5M(pH=8.8)和0.5M(pH=6.8)放在4度冰箱
: marker:新買，波士頓的protein marker，middle range，Cat NO:PT-PM01
: 目前問題:
: 1.我的marker完全沒有分層，可是我有放別人的marker，可以看到不同顏色的Band
: 是不是我的marker有問題，還是我買錯了?(什麼是prestained marker)
Prestained marker
是在SDS電泳中已經有顏色的蛋白質片段，不用再另外染色。
非prestained Marker需要再藉由Coomassie Blue等染劑來成色。
所以確定是Prestained好的？
: 2.第一次製膠時，感覺膠體作的不是很好，雖然膠片有凝結，但是tube內的沒有
: 後來跟別人借Acry/Bis來重新配，也用自己的Acry/Bis配一管，兩管都有凝在Tube
: 但是感覺我的凝膠表面不是水平狀，但是別人的Acry/Bis配的，表面很平
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Separting Gel表面?
有用水壓平？還是不平？
不過我感覺是制備時沒有混合均勻又有滲漏。
我們實驗室通常會用50ml tube配好後先蓋上蓋子mix一下。
然後再loading。
TEMED一定要讓他均勻。
: 3.在stacking時，每條lane的dye都會越來越胖，
: 隨著時間流逝，別人家的marker，band呈梯形狀，這樣正常嗎?
不懂您敘述的意思
: 4.APS粉末能否放在室溫??
: 藥劑/藥品在配置上和保存上有哪些要注意的??
APS粉末，我們家是放室溫藥櫃，
隔壁實驗室有放四度冰箱的。都有。
不過APS液體的話，我們是分裝放-20(每管100ul)
我習慣做上下層膠的時候，就直接100ul直接Show hand
時間抓的好的話，對我來說這樣凝膠快但是還有充足的時間可以loading。
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※ 編輯: datro 來自: 218.171.139.199 (09/16 14:44)
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