Re: [問題] SDS-PAGE跑膠很多問

看板Biotech (生命科學)作者linzhengzhan (研究所：碩士班vs博士班)時間19年前 (2006/09/16 14:17)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《leondemon (狗狗)》之銘言： : 我是第一次跑SDS-PAGE : 跑PAGE的藥劑幾乎都是買新的~ : 藥品狀態如下: : Running Buffer:放了一年的10倍stock(已開封)，跑膠前稀釋配置完畢。 : Acry/Bis:放了一年，未開封，一直躺在4度冰箱 : APS:新買藥粉，配了1CC，冰在-20冰箱 : TEMED:新買藥劑，平時放在陰暗處，瓶子為褐色避光材質。 : SDS:新買藥粉，配了10%放在室溫 : Tris:新買藥粉，配了1.5M(pH=8.8)和0.5M(pH=6.8)放在4度冰箱 : marker:新買，波士頓的protein marker，middle range，Cat NO:PT-PM01 跑SDS-PAGE，我也算是新手 (時間約半年吧！) 我所知道的有限…… : 目前問題: : 1.我的marker完全沒有分層 (可以形容一下結果長什麼樣子嗎？或是會有什麼現象之類的……)，可是我有放別人的marker，可以看到不同顏色的Band : 是不是我的marker有問題，還是我買錯了?(什麼是prestained marker) ^^^^^^^^^^^^^^^^^ Pre-stained Marker是指說marker的每一條band (大部份是一種特定的protein)，在製程中就加以染色，所以在run gel的時候就可以直接以肉眼觀察到現在多大 (kDa)的位置跑到什麼地方之類的……;另一種的Marker就沒有做這樣的處理，所以一但跑開的話，就是透明的，需要在跑完的時候用Comassie Blue染色才可以被看見…… : 2.第一次製膠時，感覺膠體作的不是很好，雖然膠片有凝結，但是tube內的沒有 : 後來跟別人借Acry/Bis來重新配，也用自己的Acry/Bis配一管，兩管都有凝在Tube : 但是感覺我的凝膠表面不是水平狀，但是別人的Acry/Bis配的，表面很平這有沒有可能是與Acrylamide/Bis-acrylamide的比例有關，我實驗室是買 commercial的，所以不知道；但是我很有興趣了解……就順道一起請教了…… : 3.在stacking時，每條lane的dye都會越來越胖， : 隨著時間流逝，別人家的marker，band呈梯形狀，這樣正常嗎? : 4.APS粉末能否放在室溫?? : 藥劑/藥品在配置上和保存上有哪些要注意的?? APS的powder，我家是放在室溫，泡開的10% APS是放在4℃保存 (10ml用了半年，目前仍在使用中)。TEMED放置於4℃冷存，我個人的使用方式是分裝到Eppondrof中，用鋁箔包好避光，以方便使用 (因為目前用一次，最多不超過15λ)；也有人是直接一整瓶拿了就用的，見人見智……。 : 麻煩各位前輩幫忙了~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.139.132

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