Re: [問題] RT PCR的問題
看板Biotech (生命科學)作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)時間19年前 (2006/10/05 21:03)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串2/3 (看更多)
※ 引述《iris0542 (gg)》之銘言：
: 我現在在做RT PCR
: 不管我怎麼試internal control跑PCR後
: 就是不一樣多
: 我絕得很奇怪 所以就拿了cDNA去測量
天啊，你的RT enzyme用很多吧，還可以拿去測OD?
: 發現量其實沒有差很多
: 所以我又拿了cDNA含量較近的幾管去跑PCR
: 結果GAPDH還是有的多 有的少 ~~
: 還有有的基因根本就只有positive control做得出來
: 其他的band都超弱
: 想請問大家 我的問題出在哪裡?
: 是機器的溫度不準嗎 ?
: 還是cDNA丟太多?(我用3ug去翻cDNA 3ug去pcr)
3ug是多了點....1ug錯錯有餘，基本上我覺你的問題再rt....
建議你考慮1> Oligo dT還是random heximer?你要ｐｃｒ的基因其mRNA有枚特殊結構？
2> denature是否確實？建議反複一次在加入RT的材料...加材料也有順序，
請教一下學長姐或老師
3> cDNA很不穩定，別一直反覆解凍，越多次越不准
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