Re: [問題] RT PCR的問題
※ 引述《Mouseking (叫我老鼠王....-_-)》之銘言：
: ※ 引述《iris0542 (gg)》之銘言：
: : 我現在在做RT PCR
: : 不管我怎麼試internal control跑PCR後
: : 就是不一樣多
: : 我絕得很奇怪 所以就拿了cDNA去測量
: 天啊，你的RT enzyme用很多吧，還可以拿去測OD?
我想這根enzyme用量無關
你拿cDNA去測濃度，差不多是很正常的
因為測的幾乎都是free dNTP的在吸光
: : 發現量其實沒有差很多
: : 所以我又拿了cDNA含量較近的幾管去跑PCR
: : 結果GAPDH還是有的多 有的少 ~~
: : 還有有的基因根本就只有positive control做得出來
: : 其他的band都超弱
: : 想請問大家 我的問題出在哪裡?
: : 是機器的溫度不準嗎 ?
: : 還是cDNA丟太多?(我用3ug去翻cDNA 3ug去pcr)
: 3ug是多了點....1ug錯錯有餘，基本上我覺你的問題再rt....
: 建議你考慮1> Oligo dT還是random heximer?你要ｐｃｒ的基因其mRNA有枚特殊結構？
: 2> denature是否確實？建議反複一次在加入RT的材料...加材料也有順序，
: 請教一下學長姐或老師
: 3> cDNA很不穩定，別一直反覆解凍，越多次越不准
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◆ From: 140.114.100.165
※ 編輯: aggaci 來自: 140.114.100.165 (10/06 00:44)
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