Re: [問題]請問各位有關於PCR再現性問題

看板Biotech (生命科學)作者circleming (新世紀音樂)時間19年前 (2006/11/01 10:56)推噓1(1推 0噓 0→)

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※ 引述《piggylo (piggy)》之銘言： : 目前我做的PCR或RT-PCR都會面臨到再現性不好的問題 : 例如有些sample第一次跑是會有產物的，可是之後再多跑幾次又會不見了 : 為了排除是否因為DNA或cDNA品質不好， : 我有檢查過DNA的ratio以及cDNA的GAPDH表現 : 結果都是OK的，可是往往在做PCR或RT-PCR時，就會出現反反覆覆不同的結果 : 讓我很困擾，因為自己無法解決也沒辦法向老師報告實驗結果 : 因此希望在這裡可以請教各位看看是否是哪邊有問題，謝謝。我之前也有這樣的問題，但是到最後解決的方法卻很扯：問了幾個實驗室，他們也跟我說可能template有問題～畢竟我是第一次抽mRNA然後cDNA synthesis.. 但是template OD ratio還OK～ -_-" 重新再做一次cDNA...同樣沒用～還考慮會不會是水的問題～也想到了有沒有可能是enzyme活性變差～或是reagent污染～使用DMSO racipe也沒有用～到最後學姐用讓人不太舒服的方法：叫另一個常做PCR的學姐跟我同時做（side by side）且使用該學姐的recipe..（未含DMSO）結果～居然產物又出現了.... 至今～還是不確定到底是哪裡有了問題～（我認為應該是當初學姐給我的recipe 有問題）不要只考慮template出問題～有可能其他部分也會影響～且現在將template放在4℃（如果常用）因為反覆解凍可能也會影響.... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 12.206.233.228 ※ 編輯: circleming 來自: 12.206.233.228 (11/01 11:50)