Re: [問題] 關於Inclusion Body的純化
看板Biotech (生命科學)作者snowtree (blue eyes blue)時間19年前 (2006/12/06 16:01)推噓3(3推 0噓 5→)留言8則, 2人參與討論串3/3 (看更多)
※ 引述《ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)》之銘言：
: ※ 引述《brigand (台灣加油)》之銘言：
: : 我的蛋白質已經不可能形成Native Form
: : 所以純化Inclusion Body是我唯一的選擇
: : 我的Protein 是 GST-fusion protein
: : 是使用 Glutathione Sepharose 來結合然後沖提出來
: : 想請問板上的大大們
: : 如果我的Inclusion Body是溶在 PBS + 8M urea + 10mM PMSF 的環境下
: : Glutathione Sepharose 的 binding 能作用嗎?
: : PMSF 跟 Urea 是否會影響 binding 呢?
: 基本上 GST 是和 Glutathione Sepharose (以下簡稱resin)
: 上的 10 個 C 原子結合，藉此和其它 crude 分開
: 如果你的蛋白這麼「頑劣」，甚至接在 GST 後面還不可溶的話
: 那麼上述的這套方法並不適合你使用
: 因為你的 system 含有 urea，換句話說，連 GST-tag 都被 denature
: 那 resin 要認什麼?
如果po 的protein 是his-tag 的 是沒問題
用denature bfr 處理後 使inclusion body 回溶
在去純化 跑sds 是可以看到protein的
GST-tag 的話 就不太行了 純化後蛋白的量一定很少很少
甚至純化不出來 而且你接下來的實驗
如果是需要native的蛋白 那如何去refolding
又是一個問題
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.131.122
推
12/06 17:13, , 1F
12/06 17:13, 1F
→
12/06 17:14, , 2F
12/06 17:14, 2F
推
12/07 15:10, , 3F
12/07 15:10, 3F
→
12/07 15:15, , 4F
12/07 15:15, 4F
→
12/07 15:17, , 5F
12/07 15:17, 5F
推
12/07 19:45, , 6F
12/07 19:45, 6F
→
12/07 19:46, , 7F
12/07 19:46, 7F
→
12/07 19:47, , 8F
12/07 19:47, 8F
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 3 之 3 篇)：
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
