Re: [問題] DNA電泳膠體純化

看板Biotech (生命科學)作者philesazumi (苦悶阿)時間19年前 (2007/02/02 10:48)推噓4(4推 0噓 0→)

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有些純化的kit有時會有這樣的狀況產生（綠盒...淡藍盒）像我們實驗室大部分都用Vxxgene(便宜)....用起來也ok 但是也有買一組Qxxgene...如果V牌一直有問題....就用Q牌做還有問題...就是p的不是你要的...到目前都是這樣... 我是以時間為前提....建議你其實如果跟平常做的步驟沒改變的話（想不出問題所在）你就兩個都送定序...一條才NT$280元...可以解決你的疑惑... 也不用妳浪費時間...浪費你的reagent 電壓大小好像沒有大的差別...他現在是純化後有兩條band... 不是分不開....TA cloning是個不錯的選擇....我也有用這個很快拿到我要的 ※ 引述《shuyanc (趕快做出來吧！)》之銘言： : 在操作的過程中造成的污染不可能和你 PCR 產物一樣多吧！ : 應該是 PCR product 本身的問題 : 至於一開始沒看到可能是 loading 的量太多，兩條 band 就黏在一塊兒了吧！ : 如果是要做 gel extraction 的 : 建議用 low voltage 來分離 : (我的 power supply 只能調 50V/100V，所以我只能選50 : 如果你的能調，可以用更低一些) : 然後要用適合你 PCR size 的 gel percentage 喔！ : 如果還是分不好，就先做 TA cloning 吧！ : ※ 引述《shamtg (shan)》之銘言： : : 請問各位有經驗的人士們 : : 進行 cDNA 電泳膠體純化後 : : ?什麼反而會有兩條 band : : 我的步驟如下 : : 1.病毒中先萃取出的 RNA : : 2.進行 RT-PCR : : 3.進行跑膠 : : 結果我跑出來的膠有一條 major band 和一條 primer dimer band : : 所以我又進行了以下 (因為要送定序,所以我不希望有 primer dimer band) : : 1.跑電泳膠 : : 2.將電泳 : : 3.膠進行照膠 : : 4.將 major band 進行切膠 : : 5.將切下來的 major band 進行純化 : : 6.進行跑膠 : : 跑出來的結果發現在 major band 上方約 0.1 cm 竟然還有一條 band : : 這是發生什麼事了呢? : : 是切膠的過程出了問題 : : or : : 膠體純化出了問題 : : 拜託各位了 !! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.174.141