Re: [求救] 藥物顏色對 MTT 吸光值的影響
※ 引述《choyalove (我們說好了唷~)》之銘言：
: [原因]
: 實驗的藥物本身有顏色，在測定細胞存活率時候發現吸光值
: 異常高出control 組，懷疑是藥物顏色殘留而影響到的
: [步驟]
: 我們實驗室之前做 MTT 是
: 1. 種好細胞之後，培養24hr 讓細胞貼附뀊: 2. 加藥或是樣品處理
: 3. 處理時間到達之後，吸除舊培養液
: 4. 加入 100 μl MTT 反應液 (0.5 mg/ml)，避光反應 1hr
: 5. 移除 MTT 反應液，加入 100 μl DMSO
: 6. 測波長 570nm 吸光
: 因為我樣品本身就有顏色，加藥時樣品是以serium free DMEM 稀釋
: 至作用濃度，雖然最後會移除掉含有樣品的培養液，可是這幾次數據
: 太詭異了，懷疑是不是我樣品本身顏色殘留而影響到後面 MTT 吸光...
: 我自己考慮方法是:
: 1. 作個對照組
: 但是我加 MTT反應液之前就會移除掉含有樣品的培養液了
: 不知道樣品顏色吸光對照要怎麼做比較好
: 2. 移除含有樣品培養液之後，加 MTT 之前
: 加入一步 PBS wash 動作，可是我的細胞是 PC12，半貼附型不是貼很緊
: 我怕我多加洗的動作會造成細胞 loss 掉更多，誤差更大 = =
: 不知道大家在進行 MTT 時，碰到樣品或藥物本身顏色深긊: 有什麼可以建議嗎？謝謝~
可以試試看WST-1,XTT等其他試藥會不會也起反應
嗯...如果你們實驗室錢很多,可以任你try的話...
關於藥品顏色干擾,應該在做中藥吧? 猜的
建議你...帶control進去!
除了沒有細胞外,其他條件都設定一樣(一樣有加藥,閉光,清洗~~等步驟喔!)
如果藥物真的會干擾MTT,應該可以看到一個線性的趨勢
再把實驗組(有細胞的)的結果扣除,含藥控制組的結果
這樣就可以得到你要的東西啦~~
最後,別忘了用trypen blue作確認~IC50 附近抓幾個點來做做看
^^
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推
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