Re: [求救] 藥物顏色對 MTT 吸光值的影響

看板Biotech (生命科學)作者chinolocal (一個人= =)時間18年前 (2007/10/27 23:17)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《choyalove (我們說好了唷~)》之銘言： : [原因] : 實驗的藥物本身有顏色，在測定細胞存活率時候發現吸光值 : 異常高出control 組，懷疑是藥物顏色殘留而影響到的 : [步驟] : 我們實驗室之前做 MTT 是 : 1. 種好細胞之後，培養24hr 讓細胞貼附뀊: 2. 加藥或是樣品處理 : 3. 處理時間到達之後，吸除舊培養液 : 4. 加入 100 μl MTT 反應液 (0.5 mg/ml)，避光反應 1hr : 5. 移除 MTT 反應液，加入 100 μl DMSO : 6. 測波長 570nm 吸光 : 因為我樣品本身就有顏色，加藥時樣品是以serium free DMEM 稀釋 : 至作用濃度，雖然最後會移除掉含有樣品的培養液，可是這幾次數據 : 太詭異了，懷疑是不是我樣品本身顏色殘留而影響到後面 MTT 吸光... : 我自己考慮方法是: : 1. 作個對照組 : 但是我加 MTT反應液之前就會移除掉含有樣品的培養液了 : 不知道樣品顏色吸光對照要怎麼做比較好 : 2. 移除含有樣品培養液之後，加 MTT 之前 : 加入一步 PBS wash 動作，可是我的細胞是 PC12，半貼附型不是貼很緊 : 我怕我多加洗的動作會造成細胞 loss 掉更多，誤差更大 = = : 不知道大家在進行 MTT 時，碰到樣品或藥物本身顏色深긊: 有什麼可以建議嗎？謝謝~ 我有點好奇你們用的是什麼藥說還有您的DATA呈現什麼樣的狀態阿為何會讓您覺得OD值有受影響我有點好奇，說不定我們也有類似的情況但是我們沒有發現我們實驗室也有使用MTT偵測CPAE的增生我們是先treat藥物(中藥)，將藥物移除後用PBS wash 細胞是endothelial cell，會wash 2~3次後加入MTT 在加入MTT之前，先將MTT(溶於PBS)稀釋成1/5，CPAE用MEM養，所以用MEN稀釋加入MTT後incubate 4個小時，移除MTT反應液加入DMSO 測OD 這樣的流程RUN了一年多都還滿順的應該不會有問題吧^ ^|||||||||||||||||| -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.64.80.110