[討論] 想請問PCR時遇到smear情況的原因

看板Biotech (生命科學)作者 (阿矇)時間18年前 (2007/11/28 17:47), 編輯推噓5(502)
留言7則, 5人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
我最近開始用toyobo的polymerase作PCR 設定如下 95度 10分 95度30秒 55度30秒 72度01分 30cycles 72度10分 我的target長度1Kbp template是細菌的genome 我抽出DNA後沒有稀釋直接取1micro 到100micro的反應系統裡 結果出現的都是亂七八糟的smear 我目前想到原因可能是template太濃 那還有其他原因可能smear嗎 像是TM太低之類的?? 我有爬過文啦..可是沒得到想到的東西^^" 想問問有經驗的各位大人 ^^" 謝謝唷 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.55.220 ※ 編輯: mournermind 來自: 140.113.55.220 (11/28 17:48)

11/28 18:06, , 1F
可能是TEMPLATE太濃
11/28 18:06, 1F

11/28 21:02, , 2F
同樓上看法! 不如先測一下genomic DNA濃度 稀釋後再做一次試
11/28 21:02, 2F

11/28 23:22, , 3F
濃度過濃之外,考慮兩件事情.1phonel/Chloroform過一下
11/28 23:22, 3F

11/28 23:23, , 4F
去除點蛋白質干擾,再者體積改成50 or 25體積小點...
11/28 23:23, 4F

11/28 23:25, , 5F
體積縮小,PCR反應有時會好點
11/28 23:25, 5F

11/29 01:57, , 6F
enzyme的說明書看了沒?請仔細看過照著上面建議做一次
11/29 01:57, 6F

11/29 16:59, , 7F
喔喔好謝謝大家的建議^^我也會去看一下說明書!!
11/29 16:59, 7F
文章代碼(AID): #17JJazOr (Biotech)
文章代碼(AID): #17JJazOr (Biotech)