[求救]primer design之我是新手
大家好呦
最近想要找幾種基因跑 Q-PCR
打算從NCBI找SEQUENCE
用PRIMER 3 來設計
請問一下在用PRIMER 3 設計的時候
大家會考慮到什麼參數呢
我目前只有對Tm 和PRODUCT SIZE有所限制
（我是用syber green系統）
另外
為配合其他基因一起跑
目前同一盤設定的溫度為
annealing temp 60度
elogation temp 72度
請問這樣大家會建議
PRIMER的Tm多少比較好跑呢
最後一個問題就是
我之前請明欣合成PRIMER
他合出來的Tm跟我當初設計的差很多
（低了二十度 70變50）
我反應後
他的理由是每種程式計算TM的方法有差
但是會差到那麼多嗎？？
這樣我的 annealing temp也不知道從哪裡測試了 ︿︿；
有人有碰到跟我一樣的問題嗎
挖真是有點落落長
感謝大家的耐心歐
希望大家新年快樂呦
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