[討論] cloning

看板Biotech (生命科學)作者 (小黑豬)時間18年前 (2008/03/20 22:40), 編輯推噓0(000)
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我使用PCR的方式將目標基因p出來,將PCR product由gel純化出來,再將其與T voector 進行ligate,並進行transform。結果可以長出蠻多的colony。接下來想要將其clone到 pEGFP-N1,使用enzyme將T vector上的gene切下並elute出來,同時也使用相同的enzyme 切pEGFP-N1(不過可能兩個切點太近,只有約4-50 bp,所以gel上並看不出被切下來的 band,也不太確定有沒有切開),將兩者放在一起liagte,之後進行transform。但是 長出來的colony非常少,或者完全沒有,不管我的基因是600bp或1600bp,都是這樣,各 位有沒有任何看法?為何這樣的liagtion似乎好像效率不高? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 122.123.138.104
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