[求救] cloning 失敗好多次 就是接不起來...
我的insert大概是1400bp
vector是pAS2-1 (Clontech)
切單刀
所以有用CIP處理vector
切完酵素之後跑電泳切膠
gel extraction之後
再做ligation
16度C overnight
因為我的insert量很少
所以我insert跟vector的ligation比例用
3:1 3:0.5 5:0.5
還有做vector的(切完酵素之後再ligation)
可是
transform之後
盤上一顆也沒長
vector only的也沒長...
本來老闆覺得是我技術不好
transform有問題
所以我上次有多做一組沒有切過酵素的vector
那次就那盤沒切接過的有長而已
如果說是我ligation的比例不好之類的
我都可以接受
可是
連vector only的都沒長
讓我真的不知道該怎麼改我的實驗
想請教大家連vector only 的都沒長有可能是什麼原因?
buffer之類的都是公用的
別人的clone都有長
就我的長不出來...
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.178.29
推
03/27 04:32, , 1F
03/27 04:32, 1F
推
03/27 11:37, , 2F
03/27 11:37, 2F
推
04/06 22:33, , 3F
04/06 22:33, 3F
討論串 (同標題文章)
以下文章回應了本文：
完整討論串 (本文為第 1 之 2 篇)：
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章