Re: [求救] western的band到了下方會變寬
※ 引述《yesdora (話不投機半句多)》之銘言：
: 我在跑western時有時會出現像下面這樣的結果
: 10% gel，stacking 80V 30min, running 150V 50~60min
: 拍出來的圖片(上半部) http://ppt.cc/I!-r
: 拍出來的圖片(下半部，beta-actin) http://ppt.cc/q5rD
: 這個同一張膜，我在打一抗之前才把它剪成上下兩片
: 在上半部的下端可以看出來它擴散了，如果我不剪的話拍出來的照片應該會像梯形那樣
: 這樣是smiling嗎？
: 我一直都會同時跑二片膠
: 但通常出問題的都是其中一片，另一片就很正常(筆直的往下跑)
: 所以是哪個環節出問題了我也一直很困惑
: 不曉得是哪裡出問題了，請強者們救救我！
: actin被切掉的那個sample我不就等於白做了@@
: 另外，我看的蛋白質都很大…273和280kda
: 為了區就actin只好用10%的gel
: 不曉得有沒有方法可以讓大分子量的蛋白質分離的更開然後又可以用actin補正的方法嗎？？
: 先感謝大家！m( _ _ )m
1. 用gradient gel
2. 用低電壓跑
我的習慣用85v跑前10分鐘 之後用100v跑
3. 就是中間的running buffer 有時候會因為電壓的高熱蒸發掉
要視時機補滿
個人經驗是如果沒有是時機補滿, 會跑出所謂的笑臉(smily curve)
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