[求救] transfection efficiency normalize

看板Biotech (生命科學)作者 (RICHMAN)時間14年前 (2011/06/02 16:00), 編輯推噓5(508)
留言13則, 8人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
請問可以使用transfect進入細胞內plasmid上的ampicillin gene 來做normalize嗎? (i.e. 抽細胞total DNA, 同時也會抽到transfect到細胞內的 plasmid DNA, 然後設計 一對primer, 用來amplify amp這個片段, 然後用real-time PCR, 來定 量normalize), 但文獻上似乎沒人用過這個方法, 大部分都是用co-transfect, 請問大家這個方法可行嗎? 謝謝^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.94.72

06/02 22:09, , 1F
不行,amp不會表現,不能用來normalize
06/02 22:09, 1F

06/02 22:26, , 2F
應該會不準 因為每個細胞吃到的plasmid數量不同
06/02 22:26, 2F

06/02 22:30, , 3F
原po以amp片段代表進入細胞的plasmid量,樓樓上何以不行?
06/02 22:30, 3F

06/02 22:34, , 4F
transfection的目的不一定看protein,RNA表現,也有人偵測DNA
06/02 22:34, 4F

06/02 22:38, , 5F
只是像luc實驗單純看protein表現的話,還要realtime太麻煩了
06/02 22:38, 5F

06/02 22:42, , 6F
同意b大
06/02 22:42, 6F

06/02 23:21, , 7F
我也不懂為什麼不行?!要定量的是plasmid不是蛋白耶~
06/02 23:21, 7F

06/03 13:43, , 8F
沒看過有人這樣做 我想是因為GFP已經很方便了
06/03 13:43, 8F

06/03 14:28, , 9F
效率最準應該是免疫染色後上flow或直接在顯微鏡下算%
06/03 14:28, 9F

06/03 19:45, , 10F
謝謝各位高收的幫忙解答
06/03 19:45, 10F

06/03 20:11, , 11F
06/03 20:11, 11F

06/03 20:11, , 12F
06/03 20:11, 12F

06/09 00:09, , 13F
跳痛一下...不能用eGFP做同樣的事嗎???
06/09 00:09, 13F
文章代碼(AID): #1DvqC0vb (Biotech)
文章代碼(AID): #1DvqC0vb (Biotech)