Re: [求救] transfection efficiency normalize

看板Biotech (生命科學)作者popopig2000 (RICHMAN)時間14年前 (2011/06/03 20:10)推噓1(1推 0噓 2→)

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※ 引述《popopig2000 (RICHMAN)》之銘言： : 請問可以使用transfect進入細胞內plasmid上的ampicillin gene 來做normalize嗎? : (i.e. 抽細胞total DNA, 同時也會抽到transfecｔ到細胞內的 plasmid DNA, 然後設計 : 一對primer, 用來amplify amp這個片段, 然後用real-time PCR, 來定 : 量normalize), 但文獻上似乎沒人用過這個方法, 大部分都是用co-transfect, : 請問大家這個方法可行嗎? 謝謝^^ 謝謝各位高手的回答目前不選用co-transfect EGFP, renilla, firefly luciferase, pSEAP2 etc.的原因是因為我的transfection efficiency是比較兩種不同細胞 (一個是ctrl,另一個是knockdown掉細胞內的一個gene) 怕上述那些plasmid的promoter (virus promoter:TK, CMV, SV40)activity 在gene被knockdown掉後會受到影響, 因此原先可能transfection efficiency 在兩種細胞沒差, 但在gene被knockdown掉那株, 由於virus promoter avitity較高而使它的產物EGFP, luciferase, SEAP等較多, 造成誤以為轉染效率較佳, 且由於實驗主題是探討那個被knockdown掉的gene, 對virus replication的影響, 所以我transfect的plasmid是一個會產生HBV的plasmid, 因此我們想說假使那個gene真的會影響virus replication, 那它同時可能也會影響co-transfect用來normalize plasmid內的virus promoter, 所以才想到這個方法. 謝謝各位朋友的解答, 萬分感激, 所以用ampicillin normalize這方法是可行的囉? 不過因為太麻煩所以沒人使用, 是這樣嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.174