[求救] Confocal螢光定量問題

看板Biotech (生命科學)作者mikis1107 (mikis1107)時間12年前 (2013/08/17 22:36)推噓7(7推 0噓 13→)

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求救求救!!! 之前我用confocal看雙染分子的螢光量一共三個分子 A B C 主要目的看A+B A+C的% of colocalization程度第一次雙染 A (紅光,二抗是M)+B(綠光,是已經接上螢光的抗體) 第二次雙染 A (綠光,二抗是M)+C(紅光,二抗是R) -->我知道A應該都染同一種顏色才對但因為B與C是老闆指定要呈現的顏色所以才把A的顏色換掉本來想換螢光顏色應該對於其分子的螢光表現量不會差太多但是現在問題來了!!! 就是有差!! 原本第一次雙染看三組檢體(NC,與其他兩組病人檢體) 螢光量比例為 1:2:2.2 第二次染的檢體螢光比例卻變成 1:2.2:2.7 (螢光量都已經減去各自的background了) 難道同一個分子同樣抗體濃度染色的condition都一樣的狀態下 (從固定, blocking,一抗濃度二抗濃度,wash時間通通一樣) 染不一樣的螢光表現量會差異到快一倍嗎??@@a 被老闆一問一整個不知道該怎麼回答~ 請問有concocal達人可以幫幫忙嗎?? 有沒有甚麼解釋方法呢?? 感激不盡!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 36.238.36.127

推

conective

08/18 11:16, , 1^F

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三組檢體是Normal control(NC) 病人第一組(10位病人) 病人第二組(10位病人) 是的第一次只看A+B A分子的螢光(紅光) 三組檢體螢光比例是NC:病人1:病人2=1:2:2.2 第二次看A+C A分子的螢光(綠光) NC:病人1:病人2=1:2.2:2.7

推

conective

08/18 11:19, , 2^F

08/18 11:19, 2^F

一抗二抗的濃度都一樣的話也會嗎??

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puec2

08/18 12:50, , 3^F

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哈哈哈哈我...我英文不太好@@a

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microball

08/18 12:54, , 4^F

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有二抗 A分子的二抗是Mouse-FITC(綠光) Mouse-TRITC(紅光) 那這樣的話可以跟老闆說 "因為我街的二抗不一樣所以導致A分子螢光強度也有差異嗎??" 但他會問我為什麼會有差異...是甚麼原因造成這種差異性..@@a

推

skyofsilver

08/19 00:01, , 5^F

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你是說紅光跟綠光的曝光程度嗎?? 三組病人在各自雙染的曝光程度一樣沒錯(曝光數值調成一樣) 但是第一次的紅光與第二次的綠光曝光數值不一樣因為在confocal上看起來同一個分子染紅光表現量是比綠光來的弱一點點也就是第一次雙染的A分子是看起來比第二次的A分子弱一點不過因為都是跟NC做比較就算表現量稍微弱一點理論上除起來的倍率應該也要差不多才對吧T__T

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puec2

08/19 10:59, , 6^F

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puec2

08/19 10:59, , 7^F

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puec2

08/19 11:00, , 8^F

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