Re: [求救] PCR問題 以及plasmid濃度換算
※ 引述《Tsuyokunaru (小強)》之銘言：
: 大家好 因為我不是生科相關科系的 但是因為實驗會牽涉到PCR
: 所以有些問題想請教......
: 我們一直都是用HBV當TEMPLATE (然後用自行設計的機構跑PCR)
: 只是最近想複製長片段 出現一些問題
: 跑膠後結果是亮在低於100bp的位置@@ (primer是大於400的)
這primer好長…還是是指產物長度？
這麼長的primer會不會有二次結構問題？
而且primer這麼長，primer dimer應該也很長吧
所以我大膽猜是產物長度？
至於100bps那個，我覺得是primer dimer
: 不管是我們的機台還是傳統機台 所以推測是我們DNA來源沒有那麼長?
: 那是PRIMER DIMER嗎? 還有其他可能性嗎?
: 然後請教相關科系學姊 她說可以用plasmid當template
: 濃度是 0.1mg/ul
: 這邊我有點不懂......
你學姊講得也不夠精確，
她只給你濃度，沒告訴你要放多少量…
這個
總之，用plasmid做模板不需要放太多量
我自己喜歡從「plasmid 總量10ng」開始進行PCR
（plasmid濃度太高就要稀釋）
: 因為我們之前都是用例如 10^8 copies/ul 來標記濃度
: 那這樣我要怎麼轉換??
: 我查了一下 鹼基對平均分子量660/mole
: 我看到有外國類似知識+的論壇有這個回答
: https://goo.gl/K5VpxV
: 可是 660 x 6 billion = 3.96 pico gram (pg) ??? u
: 不懂這是什麼意思？
: 所以還是想請問有人能淺顯易懂的解說一下嗎QQ
1. 那個討論串有另一個人提出看法啊，
不過他們在算的是基因體的量
而且也有人說他PCR會放多少「總量」的plasmid做為模板…
2.你可以用“nucleotide 分子量”去搜尋
應該可以找到較明確的換算法
（前提是你要知道你的plasmid有多少base pair）
: 然後更換成這個TEMPLATE後
: 我們的機台還是跑在低於100bp... 傳統就的確在正確位置了
: 這樣是anealing extension 時間不夠?? 還是溫度不夠? 溫度太高?
: 因為短primer是ok的......
有可能是機臺溫度不夠精準嗎？
（純猜測，機器相關的問題我不懂@@…）
: 然後還有一個蠢問題
: 查了一下plasmid 這好像是細菌或酵母菌之類才有的
: 可是HBV 不是病毒嗎@@？
天然狀況下，plasmid的確主要存在於細菌中
但在現在已經變成一個十分普遍的研究工具
你用的plamid是人工製造的產物，
至少包含你PCR 的目標基因
: 因為不是學生物的 真的不是很懂這塊 但是還是想要了解基本的
: 麻煩板友多多指教一下！！
我會的大概就是這些，
希望有幫到你，
若有錯誤的也歡迎板友指正:-)
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※ 編輯: adimsc (223.138.98.197), 02/14/2016 04:38:40
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