[求救] 抽RNA濃度很低

看板Biotech (生命科學)作者 (夢夢夢夢想家)時間9年前 (2016/06/23 13:39), 編輯推噓3(3012)
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最近實驗抽的RNA 測出來的濃度都很低 <10ng/ul 請問比較可能的原因是細胞數不夠嗎 還是RNA降解 或是抽取方法有誤? 情況: 我大概有24個sample種細胞 (種在sacffold上 所以不太好確定種上去的數量 只能控制下的細胞 大概40萬顆/個) 然後抽完RNA去量nanodrop 發現先種的11組濃度都低於10ng/ul 後種的的13組全都大於50ng/ul 260/280 , 260/230值也好看 而且嚴格說來都是同時種的 同一次實驗 只是下細胞的順序分為先下和後下 而後下的都是實驗組 所以我不太知道原因 請問有人能解惑一下嗎? (而第二次抽完 發現全部都低於 10ng/ul QQ) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.93.184 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1466660383.A.5C1.html

06/23 13:49, , 1F
說一下吧,不然會認為溶在1ml裡面濃度當然少
06/23 13:49, 1F

06/23 16:12, , 2F
用什麼方法抽?
06/23 16:12, 2F

06/23 22:16, , 3F
用kit抽的,溶在30ul的rnase free water裡
06/23 22:16, 3F

06/23 22:39, , 4F
下了 4e5 的細胞後養多久收?用哪牌的 Kit 抽的?有沒
06/23 22:39, 4F

06/23 22:40, , 5F
做均質化(homogeneous)?有沒有做 DNase 處理?
06/23 22:40, 5F

06/24 12:42, , 6F
方法寫越詳細,版友越好幫你喔
06/24 12:42, 6F

06/24 19:04, , 7F
下完一天後收細胞,廠牌是zymo的miniprep,上述的處理
06/24 19:04, 7F

06/24 19:04, , 8F
都沒有做
06/24 19:04, 8F

06/24 20:03, , 9F
你把 lysate 填到 gDNA column 時你的 lysate 是不是很
06/24 20:03, 9F

06/24 20:03, , 10F
黏稠不像一般的流體?過完 gDNA column 後加酒精有沒有
06/24 20:03, 10F

06/24 20:04, , 11F
把溶液混合均勻?有沉澱物的話沉澱物也要一起放到 RNA
06/24 20:04, 11F

06/24 20:04, , 12F
column 上。
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06/26 00:25, , 13F
低於10的 先確定不是鹽類或蛋白peak的尾巴蓋到A260
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06/26 00:25, , 14F
可能真的只是雜訊
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06/26 00:26, , 15F
我覺得是抽RNA有問題 那幾組根本沒抽到
06/26 00:26, 15F
文章代碼(AID): #1NQtOVN1 (Biotech)
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