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[求救] 細胞培養

看板Biotech (生命科學)作者 (山邱)時間7年前 (2017/12/23 15:21), 編輯推噓7(7推 0噓 12→)
留言19則, 7人參與, 8年前最新討論串3/3 (看更多)
手機排版，請見諒 大家好，小弟最近剛接觸細胞培養，有些問題想請教一下： 1.細胞種的不均勻: 我是用10cm dish去養insulinoma cell line，我習慣先把medium 先加到dish ，再把 細胞一滴一滴分散加入medium後再8字個10圈（細胞在種之前都會pipeting個10次）。上 述都是已經問過周遭的朋友改善的方法，不過還是一樣一邊超滿一邊少到長不起來。不知 道哪裡需要再改善? 2.之前在配medium時，沒有注意到血清仍有懸浮物就直接加進medium，懸浮物會影響細胞 的生長嗎? 3.解凍細胞時，1.直接把凍管的細胞液加進medium 2.離掉DMSO加新鮮medium。這兩個方 法去種細胞對細胞生長那個會比較好? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.140.204.209 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1514013679.A.4E3.html
推
12/23 15:29, 7年前 , 1F
1.先確認培養箱是不是水平的QQ 2.應該沒差 3.離掉DMSO
12/23 15:29, 1F
推
12/23 15:40, 7年前 , 2F
1. 不推薦8字，尤其dish是圓的容易有漩渦，比較推
12/23 15:40, 2F
→
12/23 15:40, 7年前 , 3F
薦10字，另培養箱水平的確有關，沒有水平儀可以用
12/23 15:40, 3F
→
12/23 15:40, 7年前 , 4F
手機包在夾鏈袋裡面用app去測。
12/23 15:40, 4F
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12/23 15:40, 7年前 , 5F
2. 有疑慮就過濾，雖然經驗上沒有差異。
12/23 15:40, 5F
→
12/23 15:40, 7年前 , 6F
3. 一般細胞是先以培養基稀釋，離心後去除DMSO，但
12/23 15:40, 6F
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12/23 15:40, 7年前 , 7F
一些較脆弱的貼壁細胞會受到離心的影響，可以先用
12/23 15:40, 7F
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12/23 15:40, 7年前 , 8F
培養基稀釋後直接培養，細胞貼附後再小心置換培養
12/23 15:40, 8F
→
12/23 15:40, 7年前 , 9F
基。
12/23 15:40, 9F
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12/23 15:43, 7年前 , 10F
請問這株insulinoma是人類的嗎？
12/23 15:43, 10F
推
12/23 20:39, 7年前 , 11F
一般細胞DMSO 最後<0.5%不會影響生長
12/23 20:39, 11F
推
12/25 00:00, 7年前 , 12F
第三點兩種都試過 偏好離掉 DMSO
12/25 00:00, 12F
推
12/25 00:21, 7年前 , 13F
1.也可能是dish的問題。2.不需過濾，離心即可
12/25 00:21, 13F
推
01/13 01:59, 8年前 , 14F
我養在T75，先取所需的media加到flask，用media rinse
01/13 01:59, 14F
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01/13 01:59, 8年前 , 15F
一下flask，之後取出放入15ml tube，再取所需細胞加
01/13 01:59, 15F
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01/13 01:59, 8年前 , 16F
入15ml tube混均勻，再一起加入T75中。
01/13 01:59, 16F
推
01/13 02:05, 8年前 , 17F
加細胞到flask時flask平放微微傾斜，加完之後靜置hood
01/13 02:05, 17F
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01/13 02:05, 8年前 , 18F
一段時間，約5-10 分讓細胞下沉plate down，移動到inc
01/13 02:05, 18F
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01/13 02:05, 8年前 , 19F
ubator的時候細胞比較不會亂飄到別的位置
01/13 02:05, 19F
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