Re: [問題] 我的電泳結果沒有亮帶 - 步驟
==> uyap (前腳走，後腳放) 提到:
以前跑的經驗是同時借別人的primer試及別人的自己的reagent
別人RCR cycle確認自己的reagent有沒有問題
如果別人的primer跟別人的reagent也跑不出來
那表示機器有問題或自己pipet有問題，沒有校正或不正確
接下來自己的reagent沒有問題後
PCR機器及pipet也沒問題以後
那就是濃度的問題
plasmid的各種濃度
MgCl2的濃度
是我之前遇到的最主要問題
也許每個人不一樣
可以去抓band最亮的濃度
其次是PCR的cycle或溫度
之前跑的各種不同cycle是都差不多
不同的cDNA，溫度有的會影響
但有文獻可查
如果自己的reagent有問題，
別人的reagent沒有問題
那就要一個個去抓
看是哪一瓶有問題，
有可能是染污，或者是沒有活性
也有可能你的plasmid在prep的過程中有問題
總而言之，就像推理一樣一個個去排除
最後就會發現問題，很耗時
做出來也不要高興
要記得negative control
> ==> wulito.bbs@ptt.cc (考完悶的緊) 提到:
> > 取菌液 1 c.c.
> > 以 10000 xg 離心5分鐘
> > 取沉澱 改加入 200ul 無菌水
> > 煮沸 10mins 以 10000 xg 離心 5 mins
> > 取上清液後
> > 取 2ul 跑 PCR
> > PCR 添加的藥劑
> > template 2 ul
> > primer 各 1 ul
> > 混合溶液 10 ul 內含
> > polymerase 1.25 U
> > MgCl2 1.75 mM
> > dNTP 200 uM
> > buffer <---- 這個產品上面沒有寫含量或濃度
> > 無菌水 36 ul
> > 之後以 95度 5 mins 1 cycle
> > 95度 30 sec
> > 55度 1 mins
> > 72度 30 sec 35 cycle
> > 最後以 2% agarose 跑電泳
> > 20 ml 的膠 以 5ul 的 ETBr 內染
> > 如果有需要增補的地方
> > 請各位大大告知 謝謝^^
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