Re: [問題]有關抽plasmid
看板Biology (生物學)作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)時間19年前 (2006/11/02 03:23)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串11/13 (看更多)
※ 引述《yearaaaa@kkcity.com.tw ( )》之銘言：
: ※ 引述《circleming.bbs@ptt.cc (新世紀音樂)》之銘言：
: > 你是用什麼protocol...
: > 有時候 kit 不一定好用～
: > 我曾經用QUIGEN做midi-prep..
: > 但是對某種low copy number的vector就效果不如預期～
: > 因此我用傳統方法作～（傳統方法也有很多種...)
: > 且加大culture volume...
: > 至少達到我要的效果～
: > 且純度也都OK～
: > 先解釋清楚你用的是何種protocol才能troubleshooting阿～
: 我不是用KIT
: 用的是自製的solution 1.2.3
: 在酒精沉澱
: 就跟聖經書上的差不多
: 在抽完時跑膠有微弱的band
: 做完RE elute後
: 再跑膠就不見囉
: 如果照你說的加大體積的話
: 是用小體積分很多管在最後復溶時再混在一起比較好
: 還是要用large volume的protocol做比較好呢?(From molecular cloning protocol I)
: 一開始的方法也是從這出來的...
用後者.....做一次banding算了一定會有DNA
建議你加入solution3後離心兩次....只取上清液....別貪心
酒精沈澱後放零下20度overnight
在離心...如果pellet還是又白又大....別高興....都是protein
用三次水溶....vortex數分後在離心.....下方pellet不要了
吸出上清液去切RE
很麻煩吧.....colume現在很便宜啦....買台製的效果就不錯啦
DNA的純度也一定比土法好....和老闆建議一下
因為你之後還要切...太多protein根本是干擾....
你run的gel loading的well處是不是很亮....都是卡這蛋白的DNA
你elute當然沒東西
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.58.54.177
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