請問有關PCR的問題
現在我想要做一個3kb左右的PCR
由於之後要接著做cloning，所以比較要求準確性
先前試過的幾個PCR酵素搭配模式：
pfu DNA polymerase (Promega) only (0.6U in 25ul)（使用期限僅到今年五月）
Blend Taq DNA polymerase (Toyobo) only (0.5U in 25ul)
Viogene Taq DNA polymerase (5U in 25ul) + pfu (同前) (0.6U in 25ul)
（用這種搭配模式的原因是因為有看過paper利用pfu專責做更正）
使用的template：cDNA （以random primers做RT）
condition：95℃ 5min
95℃ 1min
69℃ 1min (35 cycles)
72℃ 7min
72℃ 15min
（另外，第一組用pfu的在denature及anneal都拉長到3min，後來聽同事意見改短）
結果只有第一組pfu only有跑出一條700bp左右的band，其他兩組完全跑不出來
這樣子的話，我要從哪一方面著手改，才能夠跑得出來呢？
我一個同學有跟我說過，他們那邊用Merck的pfu DNA polymerase，可以很輕鬆的跑到12kb
難道真的要換Taq來做才做的出來嗎？
謝謝
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推
03/22 06:25, , 1F
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