Re: [問題] 如何將蛋白質結合在一起

看板Biotech (生命科學)作者timbrian (perk yourself up)時間20年前 (2005/05/22 18:26)推噓1(1推 0噓 1→)

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※ 引述《ROKEE.bbs@bbs.badcow.com.tw (死胖子超怕熱)》之銘言： : ※ 引述《timbrian.bbs@ptt.cc (perk yourself up)》之銘言： : : 因為想研究一個蛋白質的某個domain 的 modification : : 如何影響到另一個domain 的活性 : : 卻又不想使兩個domain 同時被 modify (兩個domain 都有modify 的位置) : : 而使用一般的chemical cross linker 會 nonspecific modification : : 其結合方式會不正確結合方式與 native 的方式會不同 : : 請問板上諸大 : : 有沒有看過任何方法 : : 可以將兩個不同的蛋白質接在一起 : : 而非是經由 cloning 的方式 : : 且接在一起的方式分別為兩個蛋白質的N端跟C端的結合 : 將domain A與fish的gene做fusion : 將domain B與bait的gene做fusion : 然後將domain A-fish的部分先做modofication : 再將domain A-fish-M混在domain B-biat混和 : 觀察有M和沒M的結果是否有差異...... : 只是這樣透過一個中間物不知是否會對您的實驗需求有影響就是 : 看起來像yeast two hybrid XDDDDD : 不然就...利用chemical reagent做partial modification吧 : 控制chemical的濃度、反應pH、buffer,etc... : 印象中Cyanylation測disulfide bond的方式也是partial modification ^^" : (最近千面人很熱阿...XDDDD) 講仔細一點我們的構想我們想研究一個蛋白質兩個 domain 的互相影響目前這個蛋白質已經有結構 (X ray) 我們想看這兩個 domain 在動態下的結構改變尤其是看其兩個 domain 如何細微的藉由結構的改變而調控彼此兩個 domain 分別為 15 kDa 與 30 kDa 其中 15 KDa 的部份想用 N15 做 labelling 而 30 kDa 的部分不沒有 labelling 分別純化出來看能不能再結合為 full length protein 再以 NMR HSQC 的方式只看其 15 kDa 的部份的結構改變這個實驗設計為最大的盲點就在如何使兩個 domain 再結合回去已知這兩個domain 中間有一個 linker 的部位但是如何能專一性的將這兩個 domain 的 N端與 C端接在一起就是個大挑戰因此 fusion 的辦法似乎是不可行所以在想有沒有其他方式可以結合這兩者 DNA 具有 DNA ligase 可以結合 DNA 的 3' 與 5' 蛋白質好像就沒聽說過可以有 enzyme 結合 N 端與 C 端 ubiquitin 結合的機制好像也不適用化學 cross link 的方法會卡在蛋白質表面胺基酸的 side chain 也會任意的鍵結在一起有沒有知道其他方式可以做的阿還是這本身就是個很難的題目?... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.64.75