Re: [問題] 如何能更有效率的取得神經細胞?
※ 引述《wadewang.bbs@bbs.badcow.com.tw (忙忙茫.....)》之銘言:
: ※ 引述《LIAR.bbs@ptt.cc (墮天使)》之銘言:
: : 今天我就取7天大wistar鼠的小腦,放入KERB後用剪刀剪碎,然後就加trpsin和DNAse,
: : 25分鐘後加inhibitor,再25分鐘後離心,取上清液用45um過濾
: ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
: 這步驟有錯吧
: 我的protocal是去掉上清液
: 留下沈澱物再用medium打散耶
: 離心過細胞都沈澱了
: 上清液怎麼會有東西XD
囧,果然弄錯了,我一直想說要過濾,所以不清楚這個步驟要幹嘛,就取錯了。
不過我這次重做,卻發生一個奇怪的問題,我在離心後,發現細胞少的可憐,而且學長
的上清液是透明的,但我的上清液卻有絲狀懸浮,很像棉絮那樣,我離好幾次都一樣,
請問這又是什麼問題呢?
我這次只是在PIPETING時,用力抵住下方,然後歪一點點再用力來回沖,想用水壓沖更
散,其他步驟則是和上次一樣,請問這是就問題所在嗎?
: : (要的細胞小於45u)然後再離心,去掉上清液在加培養液.....
: : 問題是,之後數細胞時,根本沒細胞,之前第二次離心時,也沒看到沉澱。
: : 雖然我去上清液把細胞吸掉也有可能,但我覺得根本問題就是細胞太少,也就是一開始
: : 小腦切不夠細,所以想請問一下有沒有什麼好辦法可以讓腦可以容易分離成單細胞,
: : 不用浪費太多小鼠就能取得足夠量神經細胞?我覺得用剪刀剪小腦實在不是好方法....
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太初有道,道與耶和華同在,道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造,凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭,
這生命就是人的光。光照在黑暗裡,黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦誘惑,回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間,從被造之日至今,又自今直到那審判之日的來臨。
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