Re: [問題] Real-time PCR
看板Biotech (生命科學)作者mandible (生化...go go go !!)時間19年前 (2006/12/07 22:38)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串2/23 (看更多)
※ 引述《lakerjackt (NN )》之銘言：
: 有人用過從血液中抽出的cDNA做real-time PCR嗎?
: 因為本身是用ABI的機器run real-time PCR...
: 但一直try不好PCR的condition...
: 不然就是有出來後...再做一次就沒出來了...
: 且Ct值一值都滿後面的...40上下...
: 所以一直做到沒信心...><
: 所以我想請問各位real-time PCR幾個問題..以解笨小弟我的疑惑..
: 1.real-time PCR做的時候,反應的量一定要加的很精準嗎???
: 2.ABI的real-time PCR是不是都不用設定annealing..這樣一定都做的出來喔??
: 3.因為我是用kit抽RNA,但是是用一般方法轉cDNA..所以會有可能cDNA轉的不好嗎?
: 4.請問有人用invitrogen這家的kit抽RNA嗎?...做後續效果都可做很漂亮嗎??
: 5.請高手幫我想一下我該怎麼辦...謝謝...
ans:
1.式的..不然幹嘛做q-pcr
2.理論上原廠有設好的.你可以改變!!
3.用kit理論上會抽的比較好~但是凡事皆有例外.請用MOPS跑RNA看看
是否有Degrade現象產生!也可以用A260/280/230做為RNA quality control
4.沒做過!!請高手回答!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.85.124.41
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 2 之 23 篇)：
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
21
43