Re: [求救] 抽pasmid的量都好少

看板Biotech (生命科學)作者 (快樂的理由)時間19年前 (2006/12/15 22:30), 編輯推噓4(404)
留言8則, 3人參與, 最新討論串9/16 (看更多)
※ 引述《bloodgas (奶油ˊ的夢)》之銘言: : ※ 引述《shuo218 (快樂的理由)》之銘言: : : 最近在抽plasmid 因為我們實驗室是第一次接觸細菌的實驗 : : 雖然照protocol下去做 可是抽完的濃度都少的可以 : : 下面是我的protocol 還麻煩大家可以幫我解決這個問題 : : 1 colony of successfully pGL-transformed E.Coli to 10ml prewarmed LB+ (in tube) : : Incubate o/n (16H) 37°C 60rpm : : 一次培養2管,然後將兩管倒在一起成20ml : : Centrifuge the 20ml culture at 10,000g x 5min : : 接下來的步驟都是照promega的protocol做的 : : 不過最後我們是用40ul回溶 因為上次用100ul覺得量太少 : : 結果今天做出來量更少 大概只有0.0125 ug/ul : : 實在不知道是哪邊出問題 : : 因為後面要切 然後ligase 回收 再送到E.coli : : 可是前面的量就很少 後面好像根本就沒辦法做下去 : : 大家有什麼好的方法嗎?謝謝!! : 想先請問一下實驗的細節..你是用什麼管子養菌的,第二個問題是, : 請問你是用哪一種column抽DNA 1.我是用高速離心管直接下去養的耶,這樣可行嗎? 2.我用的column是跟promega買的 他的kit是這個名字WizardR Plus SV Minipreps DNA Purification System -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.140.37.184

12/15 22:54, , 1F
promega抽plasmid這組我們lab覺得超難用,原因也是量太少
12/15 22:54, 1F

12/15 22:55, , 2F
後來用invitrogen的,真是讚
12/15 22:55, 2F

12/16 00:46, , 3F
I have similar problem with Promega kit too!!
12/16 00:46, 3F

12/16 00:48, , 4F
I just couldn't have enough yield for cloning
12/16 00:48, 4F

12/16 00:50, , 5F
I shortened the incubation time to 14hr but in vain
12/16 00:50, 5F

12/16 00:51, , 6F
I also tried high copy number pUC19. Same result
12/16 00:51, 6F

12/16 15:18, , 7F
不要用高速離心管養吧... :P 用tube喔
12/16 15:18, 7F

12/17 00:24, , 8F
對啊 我用tube喔~
12/17 00:24, 8F
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