Re: [問題] fusion protein的純化
: 在此也順便請問一下板上高手們
: 什麼情況下會形成inclusion body?
: 我在一本純化的書中看到culture size會影響
culture size 會影響的原因也很多
但是妳可以把你的培養條件設成最佳
那就可以排除他的問題
比方說
培養的體積跟錐瓶的比例
溶氧率的維持
shaker 的轉速
溫控
有的人刁的話連培養基的 autocleave 時間也要控制
因為煮太久焦糖化作用把 glucose 給破壞掉
那也會造成一些奇怪的現象
養大量養小量
不會有表現上的差別
差別是妳養大量或小量時
培養條件發生改變
比方說
妳用小瓶養大量
空間不夠
溶氧的比例較低
細菌長的不好
所以蛋白表現不出來
基本上
妳的問題其實沒有說清楚一點
妳在純化的時候那一批大量養的菌蛋白是否有表現出來
確認有表現了再去做純化
如果真的是inclusion body 的問題
再來解決inclusion body 的問題
比如說降溫
改變IPTG 濃度
或是換host
方法很多
等你確認問題
再說
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