Re: [問題] fusion protein的純化

看板Biotech (生命科學)作者yffurdyeknom (Unhurried Justice)時間19年前 (2007/02/16 12:06)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《bee (Bee)》之銘言： : 在此也順便請問一下板上高手們 : 什麼情況下會形成inclusion body? : 我在一本純化的書中看到culture size會影響 culture size 會影響的原因也很多但是妳可以把你的培養條件設成最佳那就可以排除他的問題比方說培養的體積跟錐瓶的比例溶氧率的維持 shaker 的轉速溫控有的人刁的話連培養基的 autocleave 　時間也要控制因為煮太久焦糖化作用把 glucose 　給破壞掉那也會造成一些奇怪的現象養大量養小量不會有表現上的差別差別是妳養大量或小量時培養條件發生改變比方說妳用小瓶養大量空間不夠溶氧的比例較低細菌長的不好所以蛋白表現不出來基本上妳的問題其實沒有說清楚一點妳在純化的時候那一批大量養的菌蛋白是否有表現出來確認有表現了再去做純化我之前有收小量確認蛋白有表現並且是存於supernatant中而這次收大量時的確就沒注意到收大量和收小量culture condition間的差異 (沒想過溶氧率的問題) 感謝提醒如果真的是inclusion body 　的問題再來解決inclusion body 的問題比如說降溫改變IPTG 　濃度或是換host 方法很多等你確認問題再說我想主要還是culture的問題感謝b大的提醒過年後有把問題解決的話再跟大家分享經驗謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 138.26.192.37 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.58.30.209