[求救] 有人試過用agar包住細胞後,再進行石蠟切片嗎?

看板Biotech (生命科學)作者 (rueiren)時間16年前 (2009/07/16 02:28), 編輯推噓0(006)
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各位板友好: 小弟目前進行的實驗是將一群細胞以suspension culture的方式培養之後,該群細胞會形 成sphere,但由於數量不多,所以想利用切片的方式以求可以多染一些marker 在diabetologia, 2000, Vol.43, 907-914這篇paper裡,看到他們可以利用agarose gel 固定細胞之後,再進行石蠟包埋切片等等實驗 我也曾經試過這種方式,但是遇到一些問題: 1.我自己試著以酒精對細胞進行脫水,分別為70%,80%,90%,100% EtOH於37度水浴槽 各半小時,接下來再加入xylene之後,我就看不到pellet,根據旁人的說法, 細胞若遇到xylene會變透明,不知道這樣的說法是否有人有經驗ꄊ 2.接下來要加入液狀石蠟(約60度)將xylene置換掉,但石蠟溶液本身較稠 故細胞應該不容易沈降到底部,不知道在這邊該如何更換 3.最後就是石蠟跟ararose gel的熔點問題,因為我們這邊的石蠟大約在60度左右, 所以擔心在這樣長的時間中泡在石蠟溶液裡,agarose gel會不會熔光光, 那有什麼建議可以降低細胞的lose 希望曾經做過類似實驗的板友,可以不吝分享您的經驗,再此先謝過了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.45.29.21

07/16 12:37, , 1F
Agarose gel的功能應該只是先讓細胞呈團狀,所以溶解應
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該沒有關係
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可以試試看用cryosection,我以前的同事用相同的方法
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但是她是用cryosection, 結果不錯
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本來也有想過用冷切,但是因為冷切的染色效果較差
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07/16 23:41, , 6F
老板不愛阿,還是感謝你們的回答
07/16 23:41, 6F
文章代碼(AID): #1ANX_gqk (Biotech)
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