請問有沒有人做IP-->2D的??
標題的意思是做完IP然後再跑2D的
最近作類似的實驗
就是以streptavidin beads去抓有biotin lebel的DNA
以rehydration buffer將和此DNA結合的蛋白質elute出來
(跟IP原理很像吧)
作了幾次，elute出來的蛋白質都非常非常少
我用一樣的作法跑普通SDS-PAGE時，有很多蛋白質，也有差異
但是要做2D時，蛋白質、DNA、beads的量全部加4倍
照理說，應該看到的蛋白質要比1D多很多
但是並沒有，還少很多!
我的作法是以離心收下beads
wash=>將beads拿去煮10分鐘=>再加rehydration buffer
=>取上清液(還剩大概60ul buffer沒取到，因為想避免取到beads)
此60 ul有拿去跑SDS-PAGE，結果"幾乎"沒東西!
難不成都還在beads裡嗎??怪了，都煮過了哩!
(含有urea的溶液不能煮，所以才先煮beads)
因為用這個方法的人很少，IP的人比較多
不過方法類似
所以想請教做IP後再做2D的人有沒有此問題呢?如何解決哩?
謝謝~
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