Re: 請問有沒有人做IP-->2D的??
看板Biotech (生命科學)作者timbrian (perk yourself up)時間19年前 (2006/04/28 01:02)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串2/4 (看更多)
※ 引述《aggaci (有氣質的台客)》之銘言：
: 標題的意思是做完IP然後再跑2D的
: 最近作類似的實驗
: 就是以streptavidin beads去抓有biotin lebel的DNA
: 以rehydration buffer將和此DNA結合的蛋白質elute出來
: (跟IP原理很像吧)
: 作了幾次，elute出來的蛋白質都非常非常少
: 我用一樣的作法跑普通SDS-PAGE時，有很多蛋白質，也有差異
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
可否請問 什麼作法?..
: 但是要做2D時，蛋白質、DNA、beads的量全部加4倍
: 照理說，應該看到的蛋白質要比1D多很多
: 但是並沒有，還少很多!
: 我的作法是以離心收下beads
: wash=>將beads拿去煮10分鐘=>再加rehydration buffer
: =>取上清液(還剩大概60ul buffer沒取到，因為想避免取到beads)
: 此60 ul有拿去跑SDS-PAGE，結果"幾乎"沒東西!
: 難不成都還在beads裡嗎??怪了，都煮過了哩!
: (含有urea的溶液不能煮，所以才先煮beads)
: 因為用這個方法的人很少，IP的人比較多
: 不過方法類似
: 所以想請教做IP後再做2D的人有沒有此問題呢?如何解決哩?
: 謝謝~
看不大懂..
可否請問到底是 IP 沒東西還是 IP 完跑 2D 後東西不見了?
目的是否是要釣 transcription factor ?
如果是要釣 transcription factor
為何會預期 PAGE 上看的到明顯的 band?
bead 上到底蛋白質多不多? (是沒 elute 下來還是根本極少蛋白質bind 在 bead上?)
(何不取一點 bead 直接跑 PAGE ?)
且 IP 完跑 2D 的目的為何 ?
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