[問題] 新手問 Real Time-PCR ~
各位學長姊,
剛剛上課學習如何分析 Real Time-PCR 的圖, 產生了不少疑惑.....
請各位學長姊協助我釐清一些觀念～
簡單介紹我們練習的材料:
Nanog gene, Forward & Reverse Primers, TaqMAN, SYBR I.
以下是我的疑惑...
1. 為什麼要到了 30 ~ 40 cycles 才會出現 ct 值 ?
而不是一開始前幾個 cycle 就有 ct 值的出現 ?
2. 30th cycle 前, threshold line 以下就已經有螢光訊號了,
為什麼這些不是有效的 PCR 訊號 ?
而要等到 30~40th cycle 以後才會出現具有代表性的訊號 ?
我個人的想法是:
這些不具代表性的訊號可能來自於 primer dimers 和 quencher-reporter dye probes
之間作用所產生的訊號....
以上是我對第二個疑惑的想法, 第一個.... 我還在釐清中......... >"<~
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