Re: [問題] 請問PCR Full-length cDNA ?
不知道我講的對不對~~
我剛看書看到
針對於full-length cDNA
Primer should frame a sequence as far 3' as possible so that cDNA produced
by oligo(dT) priming needn't not be full length to act as a template in the
PCR
在把3'的primer 設計更尾端吧~~
※ 引述《mandible (生化...go go go !!)》之銘言：
: ※ 引述《puec ()》之銘言：
: : 如果你的template是 cDNA，那你可能是碰到了一些secondary structure，
: : secondary structure可能在你的primer 黏上去以前就形成了，因此佔據了
: : 你的primer原本應該結合的位置。
: : 解決方法很簡單，primer做長一點，往3'延伸就可以了。我的經驗是... 36個mer
: : 的primer做不出來，加到40個mer就ok了。
: 我的data是在100bp以下一定會有的primer dimer
: 但是奇怪的就是在100bp上面左右會有primer的tetramer
: 是不是就是真的如你所說!我會在逝世看
: 我昨天用了55c還是一樣有這種狀況
: 跑了這麼久的pcr還是第一次有這種情形.快瘋了
: 要投稿的最後兩個data~~唉.卡在這做不下去
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