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請問關於EMSA的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (有氣質的台客)時間19年前 (2006/05/24 19:04), 編輯推噓4(4推 0噓 1→)
留言5則, 4人參與, 最新討論串1/8 (看更多)
之前EMSA都用DIG做的 後來因為一些問題改用isotope試試看 結果有加nuclear extract的有shift出現 但是後來以100x沒有label的、同樣的DNA去競爭(和probe一起反應) 竟然沒辦法競爭掉? 我加的nuclear extract有20 micro-gram DNA(garma-p32 labeled) 加 8 fmol 30度 incubation 30 min 好奇怪，有EMSA達人可以告訴我為什麼會這樣嗎? 我覺得很不合理 看paper 50x都可以競爭掉了，竟然100X不行?! -- http://0rz.net/da0PG 我的相簿.... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.100.165 ※ 編輯: aggaci 來自: 140.114.100.165 (05/24 19:15)
推
05/25 17:45, , 1F
請問阿家西大大~你們DIG KIT是哪家的阿~
05/25 17:45, 1F
推
05/25 21:01, , 2F
ROCHE阿~~
05/25 21:01, 2F
推
05/25 23:58, , 3F
你有先把cold probe跟nuclear extracts先prebind嗎?
05/25 23:58, 3F
→
05/25 23:58, , 4F
我都是在室溫先prebind 30mins再加入hot probe室溫20-30min
05/25 23:58, 4F
推
05/26 00:09, , 5F
我是把 competitor 先跟 protein pre-bind 37度 10分鐘
05/26 00:09, 5F
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