Re: 請問關於EMSA的問題
※ 引述《indie (band of brothers)》之銘言：
: ※ 引述《aggaci (有氣質的台客)》之銘言：
: : 再請問您一下
: : 請問您的mixture要loading時，有加dye嗎?
: : 因為我不只在一個地方看到不加dye loading
: : 於另一個well只加dye以便看跑到什麼地方...
: : 為什麼呢?
: 我最近跑的感覺是加了dye以後
: protein會沉澱 並且卡在well裡面 (可以看到明顯的particle)
: 所以有在考慮不加dye loading
: 可是我很懷疑 不加dye loading
: DNA會不會沉不下去?
: 我用的是polyacrylamide 的膠 (直立式電泳槽)
: 不知道有沒有先進有load過不加dye的DNA呢??
: 可以跑嗎?
歐! 這個我這幾天有做
的確，在well裡的抗數比之前少許多
可以沉下去啦，安啦
指不過有個風險是很怕load錯，畢竟沒顏色
不過今天跑出個奇怪的DATA
昨天重新label我的probe
想說來測試看看
過gil filtration後，抗數超強(超過2000抗)
binding完要loading前，每一管抗數大概300抗
結果跑了5%的PAGE(含0.5x TBE)後，free probe怎麼只有10抗??!
(第二個DYE沒跳海阿)
真是怪了，難道說label的效率極差媽???!!
以下是我 label的步驟
double strand DNA (sticked end，5端各突出4個T) 1.5 ul(final 1 pmol)
10x buffer 3 ul
klenow enzyme(NEB) 1.5 ul
p32-ATP 3.75 ul
water 18.75 ul
total 30 ul
37度作用2小時再過gel filtration column.
真是怪了............囧oz
--
http://0rz.net/da0PG 我的相簿....
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.100.165
推
05/29 01:42, , 1F
05/29 01:42, 1F
討論串 (同標題文章)
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章