Re: [問題] 關於MTT之後的溶解步驟

看板Biotech (生命科學)作者 (石石石)時間19年前 (2006/08/03 01:38), 編輯推噓0(000)
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※ 引述《aDnEgVeIlL (觀察者)》之銘言: : 我們做生醫材料,是用DMSO泡的,所以MTT是用IPA去溶, : 步驟是不除掉MEDIUM,加5% MTT 100u,CO2培養3~5小時,小心除調MEDIUM後, : 加IPA 200u,再取100u用ELISA讀吸光.... : 請問IPA這個步驟的量,能夠調低一點嗎?目前感覺溶劑太多,結果ELISA的讀值和 : 背景值很接近,這樣很容易被背景干擾,請問我該怎麼調整,大家又是怎麼調的呢? 你的實驗步驟好像有點問題 就我的認知跟自己做MTT的實驗來說 MTT都是泡在培養液中 因為MTT在培養液中放太久會氧化而提高背景值所以現泡現用 改良方案是高濃度5或10mg/ml泡在PBS中4度C或-20保存 使用時再用培養液5倍或10倍稀釋使用 就不會有這問題 反應完畢最後才用有機溶劑把紫色結晶溶解出來 不過MTT在有機溶劑的溶解度還蠻高的 所以若您要照原本的實驗步驟的話 改良方法應該是把IPA的MTT濃度再配個10倍以上吧 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97
文章代碼(AID): #14qECDIg (Biotech)
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