Re: [問題] 關於MTT之後的溶解步驟
※ 引述《aDnEgVeIlL (觀察者)》之銘言:
: 我們做生醫材料,是用DMSO泡的,所以MTT是用IPA去溶,
: 步驟是不除掉MEDIUM,加5% MTT 100u,CO2培養3~5小時,小心除調MEDIUM後,
: 加IPA 200u,再取100u用ELISA讀吸光....
: 請問IPA這個步驟的量,能夠調低一點嗎?目前感覺溶劑太多,結果ELISA的讀值和
: 背景值很接近,這樣很容易被背景干擾,請問我該怎麼調整,大家又是怎麼調的呢?
你的實驗步驟好像有點問題
就我的認知跟自己做MTT的實驗來說
MTT都是泡在培養液中
因為MTT在培養液中放太久會氧化而提高背景值所以現泡現用
改良方案是高濃度5或10mg/ml泡在PBS中4度C或-20保存
使用時再用培養液5倍或10倍稀釋使用
就不會有這問題
反應完畢最後才用有機溶劑把紫色結晶溶解出來
不過MTT在有機溶劑的溶解度還蠻高的
所以若您要照原本的實驗步驟的話
改良方法應該是把IPA的MTT濃度再配個10倍以上吧
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