Re: [問題] 關於ＭＴＴ之後的溶解步驟

看板Biotech (生命科學)作者LIAR (墮天使)時間19年前 (2006/08/03 21:29)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《ghjkl (石石石)》之銘言： : ※ 引述《aDnEgVeIlL (觀察者)》之銘言： : : 我們做生醫材料，是用ＤＭＳＯ泡的，所以ＭＴＴ是用ＩＰＡ去溶， : : 步驟是不除掉MEDIUM，加5% MTT 100u，CO2培養3～5小時，小心除調MEDIUM後， : : 加IPA 200u，再取100u用ELISA讀吸光.... : : 請問IPA這個步驟的量，能夠調低一點嗎？目前感覺溶劑太多，結果ELISA的讀值和 : : 背景值很接近，這樣很容易被背景干擾，請問我該怎麼調整，大家又是怎麼調的呢？ : 你的實驗步驟好像有點問題 : 就我的認知跟自己做MTT的實驗來說 : MTT都是泡在培養液中 : 因為MTT在培養液中放太久會氧化而提高背景值所以現泡現用不清楚，我們是先配好，用鋁箔紙包好冷藏，要用的時候還是避光，一個WELL加200u。 : 改良方案是高濃度5或10mg/ml泡在PBS中4度C或-20保存 : 使用時再用培養液5倍或10倍稀釋使用另外，如果一開始不除掉Medium，就加5% MTT，如果有除掉，就加2%。 : 就不會有這問題 : 反應完畢最後才用有機溶劑把紫色結晶溶解出來 : 不過MTT在有機溶劑的溶解度還蠻高的 : 所以若您要照原本的實驗步驟的話 : 改良方法應該是把IPA的MTT濃度再配個10倍以上吧 ^^^^^^^^^ 我不太懂，MTT的溶劑是什麼我不清楚，不過我說的IPA或DMSO是用來溶「MTT被細胞代謝後」的那個「非水溶結晶」，這樣IPA和MTT的濃度有關嗎？ -- 太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 202.178.178.85