Re: [求救] 抽pasmid的量都好少
看板Biotech (生命科學)作者u8524009 (VIP好人卡....)時間19年前 (2006/12/14 20:56)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串3/16 (看更多)
※ 引述《shuo218 (快樂的理由)》之銘言：
: 最近在抽plasmid 因為我們實驗室是第一次接觸細菌的實驗
: 雖然照protocol下去做 可是抽完的濃度都少的可以
: 下面是我的protocol 還麻煩大家可以幫我解決這個問題
: 1 colony of successfully pGL-transformed E.Coli to 10ml prewarmed LB+ (in tube)
: Incubate o/n (16H) 37°C 60rpm
: 一次培養2管，然後將兩管倒在一起成20ml
: Centrifuge the 20ml culture at 10,000g x 5min
: 接下來的步驟都是照promega的protocol做的
: 不過最後我們是用40ul回溶 因為上次用100ul覺得量太少
: 結果今天做出來量更少 大概只有0.0125 ug/ul
: 實在不知道是哪邊出問題
: 因為後面要切 然後ligase 回收 再送到E.coli
: 可是前面的量就很少 後面好像根本就沒辦法做下去
: 大家有什麼好的方法嗎?謝謝!!
1.因為你是用Kit抽plasmid,所使用的column都有可以容納DNA量的上限,
過多的的菌並不會讓所抽的DNA變多,反而會讓你所加的Solution 1,2,3效果變差
最好是依照portocol上所建議的菌液體積來進行實驗,
若所需要的DNA要很多,可以將搖的菌多分成幾管來進行,不要全部混合到一管進行實驗.
2.最後一步用水回溶的體積可以用100ul,並且注意最後加的時候,是加到column的中間,
最後再用真空乾燥濃縮DNA,這樣可以增加所抽取出來DNA的量
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