Re: [求救] real-time pcr的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (AS1)時間17年前 (2008/02/16 02:18), 編輯推噓9(9011)
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現在的問題是這台機器跟我沒關係 因為要是我的話 我絕對不會買 但問題是現在買了 130萬的機器 跑不出要的產物 RT-PCR產物可能再兩百多 結果去跑REAL-TIME PCR 結果都變成三百以上 甚至更高 不然就是沒有BAND 關於羅氏的售後服務 我們幾乎每周打電話過去(每週三通以上) 就是要她們來上機試做看看 結果都要三催四請 現在直接跳過技術專員 直接打給經理 因為技術專員時間很難等 前面說到要很純的樣本 羅氏會不知道我們需要的目的嗎 賣機器的不會問對方需要什麼嗎 就直接賣嗎 這台機器買的人 不是我 以前學校有 但是在養蚊子 如果說要很純的樣本 羅氏幹麻要我們買 他有英文的說明書 但我連看都不想看 之前上面的要我做 我都一直推掉 現在換學姊做 (因為有碰過那台機器只有我跟她 機器在她進公司之後買 在我進公司之前買 要是我一定阻止下來 ) 我不做是因為我不會做 她們來上課 我學校還沒畢業 也都還沒進入那家公司 一年做不到兩百各檢體 不知道為什麼要買那台機器 有本事賣 就要有本事建立環境給人家不是嗎 這台機器採購 我還沒進公司 真正做的都是底下的 有權購買的人 通常都是給意見 但不是第一線人員 如果有人可以來台南幫我們做 我們願意給車馬費 而不是像羅氏的人 你應該怎麼怎麼做 對不起 都試了 做不出來 ※ 引述《qqo8855436 (一個人的生活)》之銘言: : ※ 引述《AS1 (AS1)》之銘言: : : 機器是去年跟羅氏買的機器 : : 價格130萬 : : 在這之前 公司買的 買完之後 : : 我才應徵工作 : : 一進公司就遇到這各大麻煩 : : 首先130萬的機器 跑不出預期產物 : ^^^^^^^^^^^^^^^-> 是什麼狀況?? 沒有您的產物?? : : 但是在一般pcr又跑的出來 : : reagent也不斷換新的 還是沒有 預期產物 : : 這裡只能說羅氏真的很濫 : : 無緣無故 為了賺錢 也不幫我們分析 : : ^^^^^^^^^^^^^^-> 不知您在台灣哪裡 : 具我瞭解 roch有產品專員可以咨詢討論 : 就要我們一試再試 REAGENT花六萬多 還跑不出來 : : 想請問各位大大 : : 當收到野外感染的組織(病毒) 但是以一般的pcr跑的出來 : : 而real-time pcr的圖 呈現很多的波峰 但是螢光區線是20~30cycle才上去 : ^^^^^^^^^^^^^^-> 您可以拿跑完的去跑膠確認那些是什麼東西 : : 但是一過melting curve 卻都掉下來 : ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^->不知到您是否真的瞭解何謂mealting curve?? : : 請問大大 收到臨床檢體的樣本 適合用real-time pcr做檢測嗎(是動物檢體 : : 當初看上他的理由是因為他可以快速檢測(總覺得理由怪怪的) : ^^^^^^^^->這是他們的優點沒錯 : : 就sample抽完RNA 進行上機 就沒有結果 但是用很純的病毒或疫苗 : : ^^^^^^^^^^^^^^^^^^-> real-time的 : system下品質就有他一定的要求 : 才會有好的結果 但還是不一定做的出來 : : 請問各位大大 臨床檢體 真的用REAL-time pcr 真的可以快速診斷嗎 : : ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^->是可以的 : 但是建議您先瞭解何謂 real-time pcr : 以及他的分析原理 : 謝謝 : 感覺您對real-time pcr 這個系統不是很瞭解 : 只因做不出您所預期的結果 就覺得儀器不佳 : 要使用任何儀器及分析 不是應該充份瞭解在做嗎?? : real-time pcr 跟 一般pcr 會有一些該注意的地方 : 不管是不是roch的機器 一些基本要具備的知識 還是要先去瞭解的 : 祝您 實驗順利 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 122.123.122.19 ※ 編輯: AS1 來自: 122.123.122.19 (02/16 02:26)

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不太懂你的邏輯 決定要不要買不是買方的決定嗎?
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怎麼反過頭來怪賣方賣東西?
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再說,"很純"的定義到底是什麼? 我Q-RT-PCR跑human/mouse
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混的RNA一樣跑的出來結果 你們的問題會不會是primer設計
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不夠specific?
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PRIMER 跟PAPER訂的一模一樣
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我的邏輯是 要賣 也要教到會吧 一台一百三十萬的機器 利潤 我不相信沒有二十萬 她們專員來第二次 我就躲的遠遠的 不然等一下要我做就麻煩了 當初應徵的時候 我就不是做實驗室的工作 而是負責去現場檢剖 帶回檢體 我是進公司之後 才知道公司有這一台機器 只有幹聲連連 怎麼那麼有錢 這種機器也在買 之前我那各學校實驗室也一台 只做一本碩士論文 就蓋起來了 ※ 編輯: AS1 來自: 122.123.122.19 (02/16 02:39)

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可是人家來教本來就是要學啊...
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而且說真的草作手冊真的不難懂啊
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所以 學姊在旁邊做 我看到都很心虛 但本來這台機器就跟我沒關係 採購 組完 我才應徵進公司 看完手冊 兩個人還是做不出來阿 所以才會盧她們來 來做 也不是每各產物都有 甚至疫苗的部分 也跑不出來 ※ 編輯: AS1 來自: 122.123.122.19 (02/16 02:54)

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不然就一般的pcr機器跑跑看run完cycle再跑膠
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如果這樣有您的預期結果那真的是它們公司的東西有問題
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因為我們以前做mycoplasma的檢測也是用real-time pcr
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不過用kit也沒遇過這麼多問題PC跟NC都跑得出來
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老實說 我不知道什麼情況 但Roche的機器很多臨床都有
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原PO先別火大 先問問看有沒有其他人可以幫你用別家機器做
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慢慢抽絲剝繭吧 :) 實驗出問題不就是這樣嗎?
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02/16 15:28, , 16F
首先,你的樣品是RNA吧,有檢查過RNA的品質如何嗎?其次,rna
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轉cDNA的步驟有沒有轉成功?然後,反應條件的設定有沒有問題
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你方便講一下用的是哪台機器,使用的試劑是哪個試劑?
02/16 15:34, 18F

02/16 16:55, , 19F
覺得您是上來抱怨的不是真的想學 不然不應該是這種態度
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02/20 05:25, , 20F
現在小朋友都是這樣能力不足 就只會抱怨嗎?
02/20 05:25, 20F
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