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Re: [求救] real-time pcr的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (AS1)時間17年前 (2008/02/16 21:41), 編輯推噓22(22推 0噓 56→)
留言78則, 17人參與, 最新討論串4/9 (看更多)
※ 引述《latte366 ( )》之銘言： : ※ 引述《AS1 (AS1)》之銘言： : : 現在的問題是這台機器跟我沒關係 : : 因為要是我的話 我絕對不會買 : : 但問題是現在買了 : 個人淺見: : 再下覺得最大的問題不是機器 : 而是閣下的心態 我是來幫別人抱怨 不是我自己 因為我碰一次之後 我就不想碰了 更何況 我工作是跑現場 : 如果所有生技人非用過的機器不做 : 或者有實驗做不出來就怪當初為何要購買 : 那台灣的生技業就真的只是如此而已 : 就您所說 對方specilist來上第二次課的時候您已接手這份工作 : 那不是就該虛心求教 為何會躲得遠遠的 連聽都不想聽呢 : 況且操作手冊您也是有 居然會連翻都不想翻!? 我不是接手此工作 接手此工作的是學姊 但新人 你能給他多少工作 我變成在旁邊無所事事 別人都再忙 我會不好意思 : 就您前文的敘訴 您真的了解melting curve 的意義是什麼嗎 : 如果原理都沒搞懂 就想上機 出了問題才來怪公司為何要買妳不會用的機器 : 那我會嚴重懷疑閣下公司的人事遣派制度有無問題 我不了解 我也不想懂 真的要懂 我要拿雙碩士才想學 : 當初面事時有無雙方溝通好工作內容 我工作是跑現場 : 方便透露一下公司嗎 地雷別讓後面的人也踩到 台南的公司 今年過年分紅三個半月 但我七月一號以後才進 沒有分到 : : 130萬的機器 跑不出要的產物 : : RT-PCR產物可能再兩百多 結果去跑REAL-TIME PCR 結果都變成三百以上 甚至更高 : : 不然就是沒有BAND : : 關於羅氏的售後服務 : : 我們幾乎每周打電話過去(每週三通以上) 就是要她們來上機試做看看 : : 結果都要三催四請 : : 現在直接跳過技術專員 直接打給經理 : : 因為技術專員時間很難等 : 我做過ABI 也做過Roche的儀器 : 個人覺得 ABI的售後服務的確是很棒! : 但是Roche的也沒像閣下說的那麼差 : 請問距離上次閣下請他們來上機 到現在隔多久呢? 機器四月買的 四月教學 第一次上機六月 我八月進公司 十月再跑一次 之後就難叫 : Roche不是只有貴公司一家客戶 : 講一句較不中聽的話 : 研究設備 動輒3、4百萬以上的儀器比比皆是 : 不是買了個130萬的儀器就可以等人來做好自己份內該會的事了 可以不要建議我們買 就沒事了 買了 要負責上機 不然幹麻買 買一台做不出東西的機器幹麻 : 套句星爺的話　"實驗，不是這樣做的" : 個人建議您先將實驗原理 儀器操作步驟弄懂 : 以及格下檢體的前處理步驟弄清楚有無問題 : 包括RNA的萃取、RNA 260/280 ratio、RT的步驟、tranditional PCR、電泳 : reagent有無汙染...etc 前文已說 做RT-PCR做的出來 做REAL-TIME PCR 就算很純 也未必出的來 : 實驗是一環扣一環的 : 在下雖然沒有這裡前輩豐富的實驗經驗及理論背景 : 不過還是私以為實驗往往最大的問題不是來自機器 : 而是操作這些實驗的人的步驟 : 而且troble shooting : 本來就是該從自己能解決且最有可能的地方先做起 : 難不成閣下真的有把握換了台儀器結果就一定很漂亮的出來?? : : 前面說到要很純的樣本 羅氏會不知道我們需要的目的嗎 : : 賣機器的不會問對方需要什麼嗎 就直接賣嗎 : 很純的樣本不是問題 : 難到隨便拿個ㄚ哩布達的東西跑得出來您會很高興? : 假設是抽RNA 純度當然是越純越好ㄚ : 這跟對方需不需要知道您的目的是兩碼子事 : 您的實驗要用到什麼樣的儀器 : 本來就是自己該要先做功課 再去和廠商做洽詢 : : 這台機器買的人 不是我 以前學校有 但是在養蚊子 : 別一直強調買的人不是您 : 我猜您的實驗室 有90%以上買的東西不是您 : 那您的學校還真有錢 : 可惜了那台儀器 : 如果是Roche的lightcycler那台真的不錯用 : 操作得當 可為您省下不少寶貴時間 : : 如果說要很純的樣本 羅氏幹麻要我們買 : : 他有英文的說明書 但我連看都不想看 : : 之前上面的要我做 我都一直推掉 現在換學姊做 : : (因為有碰過那台機器只有我跟她 機器在她進公司之後買 : : 在我進公司之前買 要是我一定阻止下來 ) : : 我不做是因為我不會做 她們來上課 我學校還沒畢業 也都還沒進入那家公司 : : 一年做不到兩百各檢體 不知道為什麼要買那台機器 : 這裡不綴訴 上面提過了 : 請您心態要調整一下 我工作不是做實驗室 跑現場 你可能前文沒看清楚 不綴訴 : : 有本事賣 就要有本事建立環境給人家不是嗎 : : 這台機器採購 我還沒進公司 : : 真正做的都是底下的 有權購買的人 通常都是給意見 但不是第一線人員 : 還是那句話 請別強調機器買時您還沒進公司 : 現在的日本人也會說南京大屠殺時他還沒出生ㄚ.....(什麼跟什麼 這是廢話!) 我在 我一定擋下來 : : 如果有人可以來台南幫我們做 : : 我們願意給車馬費 而不是像羅氏的人 你應該怎麼怎麼做 : : 對不起 都試了 做不出來 : 您不妨把您試過的條件 過程寫清楚 : 說不定有些部分是您沒注意到 : 我想板上很多有經驗的前輩會不吝給您指教 : 至於想要請人代做 雖然那也不失一個方法 : 不過我只能說.. : 實驗還是您自己的 盡可能得靠自己去完成他會有很大的成就感 : 現在有這個版面是讓大家線上討論 : 如果真有那麼好心的人 願意幫忙人代做實驗 : 我想我會很想發給他一張卡........(您真是個大好人ㄚ~~~~~~~) 這各實驗跟我一點關係都沒有 我完全不想碰這台機器是因為 在動物體內檢測出極少量的病毒有意義嗎 會致病 我只相信一般的PCR 說難聽一點 REAL-TIME PCR 我不認為會贏一般的PCR 拜託人來做是因為 專家都做不出來了 更何況我們 羅氏的小姐來 也不是每各SAMPLE都出的來 還是先跑完RT-PCR才跑REAL-TIME PCR 這有什麼意義 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 122.123.96.155 ※ 編輯: AS1 來自: 122.123.96.155 (02/16 21:42) ※ 編輯: AS1 來自: 122.123.96.155 (02/16 21:51)
推
02/16 21:56, , 1F
QPCR優點在於可以定量...你ㄧ般PCR要定量可以，你知道多麻
02/16 21:56, 1F
→
02/16 21:57, , 2F
煩嗎？說你不懂就你回去查資料還ㄧ直發牢騷...切~
02/16 21:57, 2F
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02/16 21:59, , 3F
請問我哪裡有說要定量 我們只要跑膠有或沒有 切
02/16 21:59, 3F
推
02/16 22:18, , 4F
可以請您學姐直接來這發問嗎? 感覺妳是來亂的!
02/16 22:18, 4F
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02/16 22:19, , 5F
又說自己不想學 來抱怨的 您走錯版了吧!
02/16 22:19, 5F
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02/16 22:20, , 6F
學習的動機沒有 發問的禮節也沒有
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02/16 22:21, , 7F
a大的意思事告訴您qPCR的優點 別搞不清楚不同機器的優缺
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02/16 22:22, , 8F
就斷言一台機器很爛! 如果您只是來抱怨不做定量幹嘛用到
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02/16 22:24, , 9F
qPCR 那您真的走錯地方了 麻煩按"<-"左轉 謝謝!
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02/16 22:35, , 10F
我只是把我遇到的情形寫出來 學習動機沒有
02/16 22:35, 10F
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02/16 22:36, , 11F
學愈多 做死的是自己 請問我前幾篇哪裡沒禮節
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02/16 22:37, , 12F
前面就已經說跑膠產物大小不對 一直跟我提定量 要定什麼
02/16 22:37, 12F
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02/16 22:39, , 13F
latte366 你說話也是反諷 別以為別人看不懂
02/16 22:39, 13F
推
02/16 22:56, , 14F
你請你學姐上來問~ 版上很多人認為你是來亂的!
02/16 22:56, 14F
推
02/16 22:59, , 15F
原po是不是公務員啊?只有公務員才會"分工"這麼仔細...
02/16 22:59, 15F
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02/16 23:00, , 16F
如果是民間的公司或助理...我是你老闆的話一定馬上開除你
02/16 23:00, 16F
推
02/16 23:02, , 17F
多做多錯..少做少錯..那不做就沒錯啦,何必問那麼多
02/16 23:02, 17F
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不是您負責的事情就不要管啦,問那麼多幹嘛...
02/16 23:03, 18F
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02/16 23:19, , 19F
因為做不出來 連帶也會被拖下水 請問開除的理由是???
02/16 23:19, 19F
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02/16 23:21, , 20F
公司換總經理 第一年 所以分紅三各半月 打破40年
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總經理說 公司只問你功勞 不問你苦勞
02/16 23:21, 21F
推
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既然會被拖下水,那建議您還是積極一點比較好
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02/16 23:22, , 23F
試八個月 耗材六萬 機器130萬 沒有做出來
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問題是我跑外面 不是做實驗室的工作
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02/16 23:23, , 25F
千萬不要半桶水響叮噹啊..哪天機器壞掉說是你用壞的就完了
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02/16 23:24, , 26F
現在是有做出來 她的功勞就最大 所以才會請羅氏專員來
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02/16 23:25, , 27F
問題是羅氏都不來 所以現在改天天打電話去盧經理
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02/16 23:25, , 28F
一般學校都是要經過認證才能使用的
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02/16 23:26, , 29F
如果只看說明書就做的出來 技術專員 還要請嗎
02/16 23:26, 29F
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02/16 23:27, , 30F
我待過兩個學校 大學和研究所 屏科和中興 從來沒聽過
02/16 23:27, 30F
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02/16 23:28, , 31F
REAL-TIME PCR 拿來做診斷 這就是我超幹羅氏的原因
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02/16 23:30, , 32F
如果人有用 那是我孤陋寡聞 那我們是動物用
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02/16 23:30, , 33F
而且診斷是不收錢 是賣飼料的售後服務
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02/16 23:34, , 34F
因為動物生病會賴飼料和疫苗公司
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02/16 23:35, , 35F
會有症狀出現 可是RT-PCR或PCR做不出來的嗎
02/16 23:35, 35F
推
02/17 09:32, , 36F
好啦我們都了解你的重點了..羅氏很爛售後很差..花了130萬
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02/17 09:33, , 37F
結果居然沒幫你把實驗做出來..130萬應該連paper都要幫你
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02/17 09:33, , 38F
寫好發好..real-time PCR不可信..直接做PCR就好了
02/17 09:33, 38F
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02/17 09:34, , 39F
反正這也不是我的事..我是跑野外的..做不出來跟我無關
02/17 09:34, 39F
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02/17 09:35, , 40F
他來教我也不想學..反正我就超幹羅氏..這不是我的問題
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02/17 09:35, , 41F
是羅氏的錯..我也不想學..花了130萬就應該把paper都給我
02/17 09:35, 41F
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02/17 09:35, , 42F
寫好直接放到我桌上..反正我也不是來抱怨的
02/17 09:35, 42F
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02/17 09:36, , 43F
以上是重點整理
02/17 09:36, 43F
請問你哪隻眼睛看到我們的檢驗報告要發PAPER 檢驗報告反而不能發PAPER 這就跟瘦肉精原理是一樣的 你發了只會害死養殖戶 所以請你眼睛看清楚 不然給你兩千加車資 你來台南做 做出來就兩千加車資 做不出來 就付你車資 否則 我比你更會打嘴砲 提供你新KIT
推
02/17 12:54, , 44F
推樓上XD 原po根本不是來求救 是來發洩的吧
02/17 12:54, 44F
推
02/17 13:07, , 45F
哪要po黑特版嗎?我也覺得原po的態度實在...唉~~
02/17 13:07, 45F
推
02/17 13:10, , 46F
我想你應該試著跟你學姐一起想辦法解決這問題
02/17 13:10, 46F
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02/17 13:11, , 47F
而且如果有症狀就表示有感染,有感染就表示應該有病原
02/17 13:11, 47F
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02/17 13:13, , 48F
病原抓不到就應該試試其他工具
02/17 13:13, 48F
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02/17 13:14, , 49F
原始一點也OK,這樣你就更能發現它們的機器有甚麼問題
02/17 13:14, 49F
就是因為用PT-PCR或一般PCR做的出來 REAL-TIME PCR做不出來(所用的檢體來源都一樣) 盧她們來解決 又不來 那買要幹麻 她們來也未必做的出來 有些樣本有出來 有些沒出來 可是這些都是用RT-PCR確認是陽性的
→
02/17 13:14, , 50F
在版上抗議人家公司有用嗎?
02/17 13:14, 50F
推
02/17 13:18, , 51F
我那時做純化用TFF濾膜用機器做完整性測試也老做不過
02/17 13:18, 51F
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02/17 13:19, , 52F
最後用最原始的方式做確定濾膜有破
02/17 13:19, 52F
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02/17 13:20, , 53F
廠商還不是一直覺得我們新拆的濾膜怎麼可能破
02/17 13:20, 53F
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02/17 13:21, , 54F
其他同事也是跟我一起想辦法啊...抱怨沒有用的...
02/17 13:21, 54F
※ 編輯: AS1 來自: 122.123.96.155 (02/17 13:32)
推
02/17 14:09, , 55F
AS1都說他很會打嘴砲了 板友就別理他了
02/17 14:09, 55F
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02/17 14:10, , 56F
讓他一個人打嘴砲打到死吧
02/17 14:10, 56F
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02/17 14:50, , 57F
感謝抬愛
02/17 14:50, 57F
推
02/17 14:56, , 58F
bluecsky summy的很棒 故推
02/17 14:56, 58F
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02/17 14:58, , 59F
就算有版友在台南也不會想為了車馬費去幫你做
02/17 14:58, 59F
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02/17 14:58, , 60F
經驗無價 如果有人做的出來 你憑啥領那份薪水
02/17 14:58, 60F
他做的出來 或做不出來 跟我的薪水 一點關係都沒有 我反而想把矛頭指向羅氏 一台做不出東西的機器 推銷他幹麻 現在只有兩個人上機過 再加其他人 第三人 第四人 第五人 還是做不出東西 更可以 怪罪於羅氏 到底這台機器好在哪 新車都有一年 三年的保固 到四月滿一年 DATE =0 比車貴 貴到沒人知道怎麼解決 你要說這個課程度濫也可以 六人有四人有國立碩士學位
推
02/17 15:15, , 61F
幫人出頭很簡單 幫人解決問題很難 語氣上尊重一下熱心的前輩
02/17 15:15, 61F
→
02/17 15:16, , 62F
有很難嗎?
02/17 15:16, 62F
推
02/17 15:22, , 63F
請各位板友冷靜阿 please
02/17 15:22, 63F
※ 編輯: AS1 來自: 122.123.96.155 (02/17 15:58)
推
02/17 16:36, , 64F
如果你跟洛是他們講話也是這種口氣，他們不甩你我也不覺得
02/17 16:36, 64F
→
02/17 16:37, , 65F
意外，有問題請教於人請虛心、低姿態，即使你是花錢的那方
02/17 16:37, 65F
→
02/17 16:39, , 66F
打錯...是羅氏
02/17 16:39, 66F
我只打過一通 之後就懶的打了 因為做過一次 不好做 就打給她們問理由 她們就說試什麼 試什麼 趕緊跳開 因為課長說 想辦法解決 難解決阿 就趕緊跑現場 另一個學姊打50通以上 我進公司後 來兩次 一次約九點 12點才來 一次約九點 九點做到四點多才離開 結論是 你們的來源太雜 所以 REAL-TIME PCR會亂黏 就陷入無止盡的回圈 請問樣本太雜 在買之前 她們就應該知道我們要做什麼樣本了吧 現在我都不出意見 以免讓人說 你出意見 怎麼自己不去做 現在是 一般RT-PCR先轉cDNA 再拿出來跑 我提意見不被採納 就放棄了 cDNA一般都做42度 一小時(我印象中) 這裡只做半小時 我就說 要不要改一下 結果得到答案是 以前做的出來 不需要改 所以放棄 纜太多事 薪水又不會增加 做死的是自己 現在只想知道 有人檢測 棄RT-PCR 改REAL-TIME PCR 如果一堆人覺得是對的 那買是對的 如果有人檢測是以RT-PCR為主 那買是錯的 先說樣本只能抽完RNA就上機(要做病毒檢測) 不可以培養 如果大家相信的是RT-PCR 叫我去幫忙 我直接說不會 如果相信的是REAL-TIME PCR 叫我去幫忙 也一定要找出答案 我們只需要跑膠 看產物有沒有 不定序 不定量 想要買其他東西的經費 都花在這台機器上 捨棄其他 換來的是一台 十各月了 WHERE ARE DATE ※ 編輯: AS1 來自: 122.123.96.155 (02/17 17:09)
推
02/18 00:22, , 67F
不定量 當初幹麻買? 要不要認賠殺出 問羅氏有無收購2手機器
02/18 00:22, 67F
→
02/18 00:24, , 68F
賣給經費不足但知道他用途的實驗室阿～
02/18 00:24, 68F
→
02/18 00:25, , 69F
線在你已經在公司了 想辦法把那台弄走阿 用傳統PCR就好了~
02/18 00:25, 69F
推
02/18 21:36, , 70F
"REAL-TIME PCR 我不認為會贏一般的PCR" 呵呵
02/18 21:36, 70F
推
02/18 21:50, , 71F
你到底是哪科系畢業的?看不出來是生物相關的
02/18 21:50, 71F
推
02/19 00:01, , 72F
我中興 一進實驗室教授就教我要自己學看原文說明書
02/19 00:01, 72F
→
02/19 00:03, , 73F
其實我知道實驗遇到問題又嘗試很多做不出來心裡會很幹
02/19 00:03, 73F
→
02/19 00:05, , 74F
但是其實看了一系列文章小弟我也看不下去
02/19 00:05, 74F
推
02/19 00:09, , 75F
學長要不要平心靜氣想一個具體的解決方案
02/19 00:09, 75F
→
02/19 00:11, , 76F
依您這種態度 我想應該沒人會願意幫您 也無從幫起
02/19 00:11, 76F
→
02/19 00:12, , 77F
假如有得罪請多包含
02/19 00:12, 77F
推
02/20 05:27, , 78F
可不可以請問你哪間學校畢業的阿 這麼弱
02/20 05:27, 78F
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