Re: [求救] 請問detect protein trimer的方法

看板Biotech (生命科學)作者officium (officium)時間17年前 (2009/04/02 23:13)推噓1(1推 0噓 1→)

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對呀不是很了解 T__T 所以基本上跑這種幾mer幾mer的蛋白就是跑native gel 然後調整buffer的PH值讓他大於蛋白的PI就可以了?? 因為以前上課學EMSA是說蛋白因為每個aa都各自有各自電荷所以整段蛋白當他是不帶電所以一定要有DNA才可以跑下來所以我就自然的想說 native gel應該不能跑吧@@ 然後SDS 跟DTT的功能還有哪些你可以跟我說嘛?? 謝謝你噢真的很感謝耶 T__________________T ※ 引述《ng0529 (花非花)》之銘言： : ※ 引述《officium (officium)》之銘言： : : 如題請問該如何做比較好呢 : : 查了paper 有人就是induce protein變成trimer後直接跑SDS page : : 好奇怪阿這樣不會denature然後變成一條bend嗎? : : 還是說我的loading dye裡面就別加DTT之類的東西啦 @@??! : : 實驗室的人是告訴我跑netive gel : : 請問protein的帶電要多負跑netive gel才跑的下來? = =??! : : 以上這兩種方法真的可以用嗎那哪種比較好 : : 請問還有別的方法嘛 : : 還有大家是用哪套系統查online protocol的呀 : : 感覺突然看到跑tri 腦袋空空都生不出來方法 : : 謝啦謝啦 :) : 整個覺得你不是很了解PAGE， : 你該從NATIVE PAGE(不管是膠還是buffer類都不加SDS) 樣品也不加熱 : 基本上你分子量多大我不清楚， : 最好設定running buffer pH>pI (通常8已經幾乎大過所有) : 因為做低%PAGE，我會不作集膠~我實驗室做到4%膠， : (我家pentamoer蛋白質115kDa左右由五個monomer組成) : 理論上你三個帶電荷會比一個多 : 加上低%PAGE孔洞加大~分子量影響變小，電荷多的會跑比較快 : 還有SDS DTT功能不一定只會denature一個功用 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 152.19.114.231