Re: [問題] help 有關蛋白質純化

看板Biotech (生命科學)作者 (海風。沙)時間19年前 (2006/12/10 01:45), 編輯推噓2(202)
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※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言: : his-tag 的特性就是會 bind Ni (鎳) : NI-NTA 是帶有 Ni 的樹脂顆粒 : 把 cell lysate 跟 Ni charged resin incubate 一段時間 : (或者是過 column) : his-tagged protein 會黏到上面 : wash 以後再用 low pH buffer 來 elute 就可以得到純化的蛋白質 : Urea 是用來 denature 蛋白質的 : 低 pH 值則可以干擾 his-tag 跟 Ni 的 binding 請問urea是要用來denature protein的用意 是否是要讓protein變成線狀好跑SDS-PAGE來分析?! 還有阿.. 如果說低pH的urea buffer 易讓protein degrade 掉 不易純化出來 我要怎麼用高pH解救我的protein?! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.151

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防止degrade的方法 低溫 或是你用低pH buffer elute下來
12/10 02:34, 1F

12/10 02:35, , 2F
後再添加一些較高pH buffer將pH值提高為中性
12/10 02:35, 2F

12/10 02:43, , 3F
至於urea與SDS-PAGE上的protein關係很多地方都可以找到
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12/10 02:44, , 4F
可以嘗試自己找找看 收穫會比較大喔..
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