Re: [問題] help 有關蛋白質純化
※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言：
: ※ 引述《aistella.bbs@ptt.cc (海風。沙)》之銘言：
: > 請問urea是要用來denature protein的用意
: > 是否是要讓protein變成線狀好跑SDS-PAGE來分析?!
: 不是
: 跑 SDS-PAGE 的時候 sample buffer 就會讓 protein denature 了
: 純化時用 urea denature 是因為
: 你不是說你要的東西是在 inclusion body 裡面?
: inclusion body 不溶啊 怎麼純化？ 只好把他 denature 掉嚕
: 另外如果你希望你的 protein 是有活性的
: inclusion body 裡面的 protein folding 反正都不對
: 要 denature renature 以後才有救
我如果要純化inclusion body的protein的話
我是會用含8M urea的buffer先去破inclusion body
也順便把蛋白質denature 溶在buffer中
然後去過column
再來可以on column refolding
(逐漸降低urea的濃度)
或是refolding後再過column
這是我們實驗室的作法
不一定是最好的方法 ><
: > 還有阿..
: > 如果說低pH的urea buffer 易讓protein degrade 掉
: > 不易純化出來
: > 我要怎麼用高pH解救我的protein?!
: 應該可以改用 immidazo
: 但是我不知道 Ni-NTA 有沒有什麼特別不能用 immidazo 的理由
應該是沒有
因為我也是用imidazol
另外也可以用EDTA
我倒是沒用過降pH值的方法
改變pH值可能還要考慮protein等電點的因素
以免沉澱太嚴重
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.99.119
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