Re: [問題] help 有關蛋白質純化
※ 引述《aistella.bbs@ptt.cc (海風。沙)》之銘言：
> ※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言：
> : his-tag 的特性就是會 bind Ni (鎳)
> : NI-NTA 是帶有 Ni 的樹脂顆粒
> : 把 cell lysate 跟 Ni charged resin incubate 一段時間
> : （或者是過 column）
> : his-tagged protein 會黏到上面
> : wash 以後再用 low pH buffer 來 elute 就可以得到純化的蛋白質
> : Urea 是用來 denature 蛋白質的
> : 低 pH 值則可以干擾 his-tag 跟 Ni 的 binding
> 請問urea是要用來denature protein的用意
> 是否是要讓protein變成線狀好跑SDS-PAGE來分析?!
不是
跑 SDS-PAGE 的時候 sample buffer 就會讓 protein denature 了
純化時用 urea denature 是因為
你不是說你要的東西是在 inclusion body 裡面?
inclusion body 不溶啊 怎麼純化？ 只好把他 denature 掉嚕
另外如果你希望你的 protein 是有活性的
inclusion body 裡面的 protein folding 反正都不對
要 denature renature 以後才有救
> 還有阿..
> 如果說低pH的urea buffer 易讓protein degrade 掉
> 不易純化出來
> 我要怎麼用高pH解救我的protein?!
應該可以改用 immidazo
但是我不知道 Ni-NTA 有沒有什麼特別不能用 immidazo 的理由
--
莫非定律:
到了期末才會想起期初曾選了一門課卻一直沒去上
補充定律:
拿到成績單才發現上了一學期的課忘了去考期末考
--
※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: ppp-70-227-5-184.dsl.bcvloh.ameritech.net
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