Re: [問題] help 有關蛋白質純化
嗯，我們的實驗室也是差不多的
但如果你用8M的URE去溶的話
我們是把8M Urea 加入binding buffer
然後去破菌
離心後收上層液，你可以在這個地方透析
再去純化，跑sds page
或是純化的過程中的buffer都要含8M Urea的去泡
純化後的蛋白wash後用都可以用imidazole去把蛋白elute下來
但你都要透析哦
ps你直接加lysis buffer是想要跑page後，不染色而去切gel來純化嗎
※ 引述《snowtree (blue eyes blue)》之銘言：
: ※ 引述《Fourfish (～四條魚～)》之銘言：
: : 不好意思 借這篇順便問個問題@@
: : 用8M Urea去溶inclusion body之後
: : 可以直接加SDS PAGE的loading buffer跑SDS PAGE嗎？
: : 我這樣做反而gel上要的band不見了 而底部有一兩條很濃的band...= ="
: : 如果不care protein的structure的話
: : 各位會建議直接用loading buffer溶pellet嗎？
: 照你的文章來看 你有去破菌嗎??
: 你只加了 lysis buffer 就要去跑膠了嗎
: 步驟應該是 1. pellet回溶 2.破菌 3.純化 4. SDS-PAGE 確認
: 你破完菌是可以先跑看看 但是你好像沒破菌的樣子 \
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